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冷藏
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长期
- 库存:
450
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 规格:
100T
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域,致力于为客户提供包括SABC(小鼠IgG)-POD免疫组化试剂盒现货促销在内的一系列分子生物学试剂产品,并提供一系列相关的技术服务。
名称:SABC(小鼠IgG)-POD免疫组化试剂盒
规格:100T
品牌:百奥莱博
编号:XH111
试剂盒组成:
1, 封闭液:10ml,5%BSA
2, Bio-羊抗小鼠IgG:浓缩液100ul。
3, SABC-POD:浓缩液100ul。
4, 稀释液:30ml。
5, 显色液:20×DAB显色液A,20×DAB显色液B
试剂盒简介:
本试剂盒适合于一抗为小鼠IgG的免疫组化实验. DAB显色。
SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的,用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质,同亲和素一样,对生物素有极高的亲和力,亲和素是一个碱性蛋白质(IP=10),经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性,对组织和细胞的非特异吸附很低,基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—Biotin Complex。SABC大约可形成一百个左右的过氧化物酶和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的酶将保证SABC具有很高的敏感性。
自备试剂:
1.粘片剂多聚赖氨酸
2. 0.01 M PBS(pH7.2-7.4)
3. 0.01M柠檬酸钠缓冲液
4、苏木素
实验步骤:
以石蜡切片热修复为例
1. 切片常规脱蜡至水。
2. 3%H2O2室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
3.可选步聚:a、热修复抗原,将切片浸入0.01M 枸橼酸盐缓冲液(PH6.0),电炉或微波炉加热至沸腾后断电,间隔5-10分钟后,反复1-2次。冷却后PBS(pH7.2-7.6)洗涤1-2次。b、酶消化,滴加消化液,37度10分钟, PBS(pH7.2-7.6)洗涤2-3次。c、不处理,直接进入下一步。
4. 滴加5%BSA封闭液,室温20分钟。甩去多余液体, 不洗。
5.用稀释液将一抗(如小鼠抗IL-10)按一定比例稀释(稀释后的一抗4℃可保存一周),也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗,37 ℃ 1小时左右或20℃时2小时左右。也可4℃过夜。PBS(pH7.2-7.4)洗2分钟×3次。(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说,阳性染色强度不够时,可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时,可降低一抗浓度和缩短孵育时间。)
6.根据使用量,用稀释液将Bio-羊抗小鼠浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul生物素化羊抗小鼠IgG浓缩液,混匀即成工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加生物素化羊抗小鼠IgG工作液,20-37℃ 30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗2分钟×3次。
7.根据使用量,用稀释液将SABC-POD浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul SABC-POD浓缩液,混匀即成SABC-POD工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加SABC-POD工作液,20-37℃,30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗5分钟×4次。
8.DAB显色:根据用量,用PBS(pH7.2-7.4)配制,按1mlPBS加入50ul 20×DAB显色液A,加入50ul 20×DAB显色液B 。混匀后加至切片。室温显色, 镜下控制反应时间,一般在5-30分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。
9.苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。
对于细胞片,常规固定后,PBS漂洗两次,再用0.5%Txiton X-100室温20分钟,PBS漂洗两次,3%H2O2处理15分钟;PBS漂洗两次,下接上面第4步。
对于冰冻切片,固定后,可用PBS漂洗两次,再接上面第二步。
注意事项:如果染色背景过高,在SABC反应之后,DAB显色之前,用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗涤切片4次,PBS洗2次,然后DAB显色。
因为免疫组化指标众多,标本不一,此步骤仅作参考。
关键词:小鼠IgG,SABC(小鼠IgG)-POD免疫组化试剂盒,XH111,百奥莱博
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| 编号 | 名称 |
| XH088 | FITC-羊抗小鼠IgG |
| XH084 | 抗原修复液(EDTA型)(50X) |
| XH019 | SYBR Green I(10000×)电泳用 |
| XH057 | ECL超敏发光液 |
| XH007 | 真菌基因组DNA提取试剂盒(非柱式) |
| XH090 | HRP-羊抗兔IgG |
| XH030 | PUC19 |
| XH046 | JM109受体菌 |
| XH021 | 6×RNA loading buffer |
| XH022 | Pfu DNA Polymerase |
| XH092 | 羊抗猪IgG(纯化抗体) |
| XH112 | 0.1%胰蛋白酶液消化液 |
| XH072 | 载体两性电解质PH4-9 |
| XH068 | 载体两性电解质PH6-8 |
| XH062 | BCA蛋白浓度测定试剂盒 |
| XH014 | 琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒 |
| XH069 | 载体两性电解质PH3.5-10 |
| XH056 | 5×蛋白上样缓冲液(配有β-巯基乙醇) |
| XH053 | 植物线粒体提取试剂盒 |
| XH010 | 动物基因组DNA提取试剂盒 |
| XH005 | 非冻型血液RNA保存液(Blood RNAwait) |
| XH083 | TMB单组分显色液 |
| XH028 | PBR322 |
| XH091 | HRP-羊抗小鼠IgG |
| XH016 | 全血基因组DNA提取试剂盒 |
| XH032 | 2×Taq PCR MasterMix (不含染料) |
| XH034 | 2×Pfu PCR MasterMix (不含染料) |
| XH008 | RNA/DNA病毒基因组提取试剂盒 |
| XH042 | DH5α受体菌 |
| XH015 | DNA产物纯化试剂盒 |
| XH064 | 细胞核提取试剂盒 |
| XH023 | Taq Plus DNA Polymerase |
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文献和实验相关专题 SABC法:ABC代表的是亲和素-生物素-过氧化物酶复合物。利用抗生物素分别连接生物素标记的第二抗和生物素标记的酶。SABC(链霉亲和素生物素过氧化物酶复合物)就是StreptAvidin Biotin Complex的英文缩写。这一方法集中体现了目前最先进的免疫组化 所必必具备的高敏感性、特异性及操作快速、简便的所有特征。 基本原理:亲和素(Avidin)存在于鸡蛋中,分子 量67000
说明:这是我今年做免疫组化的一点体会,奉献给大家。如有不正确的地方,敬请指教。同时,这也是我应付《免疫组化》的一份作业,老师给了我85分。斑竹呀,如果觉得有点用,就请鼓励一下,加点分吧!:D:D:D应用SABC法进行免疫组化染色的体会SABC(Strept Actividin-Biotin Complex)法是一种显示组织和细胞中抗原分布的简便而敏感的免疫组化染色方法。由于该方法中的链霉亲和素的等电点接近中性(pH=6.0-6.5),对组织和细胞的吸附性特别低,因而具有较低的背景。它的步骤
SABC 法与其他免疫组织化学染色方法比较 SP法或SAP法 该法由于用链霉亲和素替代ABC法中的亲和素―生物素复合物,因此背景清晰,敏感性增加,无非特异性染色,阳性反应易于辨认。是目前最常用的方法。在操作步骤中,与SABC法相比,仅有一个步骤不同,即试剂盒中的链霉菌抗生物素―过氧化物酶替代了亲和素―生物 素―过氧化物酶。因此无需使用生物素阻断剂消除内源性生物素。SP法与SAP法的区别在于前者的放大系统为链霉亲和素―过氧化物酶,后者是链霉亲和素―碱性磷酸酶,故导致
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