北京现货Pfu DNA聚合酶(Pfu酶)(含buffer)打

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名称：北京现货Pfu DNA聚合酶(Pfu酶)(含buffer)打折促销
规格：200U|1000U
产地：国产|进口
英文名：Pfu DNA Polymerase
编号：YT372
pfu DNA 聚合酶简称Pfu酶，是最常用的高保真DNA聚合酶之一。Pfu DNA Polymerase是一种来源于嗜热菌Pyrococcus furiosus的高度热稳定的DNA聚合酶。Pfu酶的分子量为90kDa。Pfu酶可以催化5’至3’方向的依赖于DNA模板的脱氧核苷酸的聚合。和Taq酶不同，Pfu酶有3’至5’的外切酶活性(proofreading activity)。另外，Pfu酶有5’至3’外切酶活性，但Pfu酶没有反转录酶活性。

由于Pfu酶有3’至5’的外切酶活性，因此在PCR扩增过程中出错的几率大大降低，出错率为2.6×10e-6。Pfu的出错率不仅远远低于Taq酶，也低于一些其它的高保真DNA聚合酶例如Vent、DeepVent、Pwo、Tli等，因此Pfu酶常作为首选的高性价比的高保真DNA聚合酶。

来源：本Pfu DNA Polymerase为recombinant Pfu DNA Polymerase，通过大肠杆菌表达纯化获得，和纯化获得的天然Pfu DNA Polymerase在各方面的性质相同。

用途：高保真PCR (high fidelity PCR)、点突变、双平端PCR克隆等。
1）Pfu酶扩增出来的DNA*(代"片")断为双平端，可以用于双平端克隆，但不能用于常规的T载体克隆。
2）dUTP和dITP或含有dUTP和dITP的引物不能用于Pfu酶介导的PCR扩增反应。

活性定义：One unit of the enzyme catalyzes the incorporation of 10 nmol of deoxyribonucleotides into a
polynucleotide fraction (adsorbed on DE-81) in 30 min at 72℃. Enzyme activity is assayed in the following mixture: 20 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25℃), 2 mM MgSO4, 10 mM (NH4)2SO4, 10 mM KCl, 0.1% (v/v) Triton X-100, 0.1 mg/ml BSA, 0.75 mM activated calf thymus DNA, 0.2 mM of each dNTP, 0.4 MBq/ml [3H]-dTTP.

纯度：不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶，不含RNA酶，满足常规PCR反应要求。

酶储存溶液：20 mM Tris-HCl (pH 8.2), 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 100 mM KCl, 0.1% (v/v) Nonidet P40, 0.1% (v/v) Tween 20 and 50% (v/v) glycerol。

10×Pfu Buffer (with Mg2+)：200 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25℃), 100 mM (NH4)2SO4, 20 mM MgSO4, 100 mM KCl,1% (v/v) Triton X-100, 1 mg/ml BSA。

失活或抑制：酚氯*(代"仿")抽提可以使Pfu酶失活。

储存条件：-20℃。

注意事项：
1）由于PCR反应非常灵敏可以扩增目的基因序列超过1000万倍，在使用Pfu酶时请注意避免微量待扩增DNA的污染，并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。
2）Pfu DNA polymerase在扩增DNA*(代"片")断时的出错率非常低，但其扩增效率也比较低。对于出错率要求不高的情况，例如RT-PCR进行定量或半定量，推荐使用Taq DNA polymerase。在扩增效率和出错率需要兼顾的情况，可以选择YTTaq DNA polymerase。在扩增2kb以下DNA*(代"片")断时，Pfu酶和Taq酶的扩增效率相近。在准确性要求很高的情况下，须选择Pfu酶。
3）Pfu酶有3’至5’的外切酶活性，在没有dNTP的情况下可以降解引物。因此Pfu酶一定要最后加入，并且要在冰浴上操作。
4）不能使用Taq酶的PCR Buffer来替代Pfu酶的PCR Buffer。

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·C端BFP标签融合蛋白质粒(蓝色荧光蛋白)
编号：YT463
英文名称：C-BFP plasmid（with CMV promoter）
规格：1μg
本质粒是哺乳动物细胞表达质粒，用于表达C端含BFP(蓝色荧光蛋白)标签的融合蛋白。该质粒含有CMV启动子，可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达。在多克隆位点的后面有一个BFP的完整编码序列，因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达C端含有BFP标签的融合蛋白。利用BFP的荧光特性可以比较容易地观察融合蛋白的表达水平和细胞内定位，也可以利用BFP抗体来检测或免疫沉淀融合蛋白。BFP与GFP高度相似，可以尝试用GFP抗体检测BFP。该质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后，可以使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。


本质粒的主要信息如下：

Feature Nucleotide	Position
CMV promoter	1-602
T3 promoter and T3 primer binding site	620-639
Multiple cloning site	651-740
BFP	741-1460
T7 promoter and T7 primer binding site	1510-1531
SV40 polyA signal	1543-1926
f1 origin of ss-DNA replication	2064-2370
bla promoter	2395-2519
SV40 promoter	2539-2877
Neomycin/kanamycin resistance ORF	2912-3703
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal	3704-4162
pUC origin	4291-4958

本质粒(5010bp)的图谱如下：


使用说明：
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2. 本质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因，构建的质粒可以用常规方法转染细胞。

储存条件：-20℃。


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·BiP抗体(GRP78抗体)
编号：YT650
英文名称：anti-BiP antibody
规格：>30次
本抗体是用人工合成的人BiP近氨基末端(N-terminus)的一段多肽(71-91位氨基酸),进行适当修饰后免疫rabbit，然后用protein A和抗原多肽亲和柱经过两步纯化得到的高纯度抗体。本BiP抗体识别的是总BiP(total BiP)，可以检测内源性的BiP。本抗体如果用于常规的Western检测，至少可以检测30次。

热休克蛋白(Heat shock protein,Hsp)是一类应激蛋白，包括Hsp20,Hsp60,Hsp70和Hsp90。这类蛋白具有分子伴侣功能，可以短时间(transiently)结合其它蛋白，并协助其它蛋白进行正确折叠。BiP(immunoglobulin heavy chain binding
protein in pre-B cells)，简称BiP，也称GRP78(78-kD glucose-regulated protein)，属于热休克蛋白Hsp70亚家族。该亚家族还包括mtHsp70/GRP75和GRP94。BiP/GRP78是一种钙离子结合分子伴侣，主要定位于内质网。BiP/GRP78是一种高度保守的对于维持细胞正常活性非常重要的蛋白。BiP/GRP78对保证蛋白进行正常的糖基化和折叠，膜蛋白和分泌蛋白的正确定位、以及阻截有质量问题的蛋白是必需的。

诱导内质网应激(ER stress)的刺激，如氧化应激，化学毒性，Ca2+离子载体，内质网Ca2+-ATPase抑制剂、糖基化抑制剂和缺氧等，可以诱导BiP/GRP78表达。葡萄糖饥饿也可以诱导BiP表达。当各种诱导条件导致ER中的蛋白折叠受到干扰并不能完全正常进行时，BiP的表达量就会被上调。随后BiP会结合到错误折叠的蛋白，以避免这些蛋白形成聚集物(aggregates)，并促进这些蛋白的正确折叠。BiP对于维持细胞稳态和防止细胞凋亡具有重要作用。BiP水平被认为是低血糖的可靠的分子标志物。在肿瘤细胞中，BiP的产生与防止凋亡、免疫系统攻击、抗肿瘤药物耐药性产生有关。在神经元细胞内出现谷氨酸兴奋性毒性和氧化应激条件下，BiP表现出神经保护作用。在阿尔茨海默病病变大脑，BiP水平下降；研究发现，BiP低表达与Presenilin-1(PS-1)基因突变有关。BiP上调可以被认为是内质网应激的重要指标。

组份：
BiP/GRP78抗体————30μl
Western一抗稀释液————30ml

交叉反应性：人，小鼠，大鼠，仓鼠，鸡，非洲瓜蟾
抗体识别位点：BiP N-terminal
分子量：～78kD
宿主：兔
免疫原物种：人
免疫原：人工合成的人BiP近氨基末端的一段适当修饰的多肽(71-91位氨基酸)
应用：WB,IC
推荐稀释比例：WB（1:1000）, IC（1:300）

注意事项：
1. 在Western实验后，请注意回收稀释的抗体。回收的抗体在进行Western实验时至少可以重复使用10次。稀释后的抗体，包括已经使用过的稀释抗体，4℃保存。
2. 回收后重复使用的抗体，使用方法同新鲜稀释的抗体。如果在重复使用过程中发现抗体出现轻微混浊现象，可以10000g离心1-3分钟，取上清用于后续检测。如果回收的抗体出现明显的絮状物或长霉长菌等情况，则可以考虑废弃该抗体。

储存条件：-20℃，有效期一年。


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ARB13298 小鼠糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)检测服务 Mouse glycogen phosphorylase mm,gp-mm ELISA KIT
杆菌肽锌 Bacitracin 1405-89-6
CYB167077 兔抗生物素
PY02-023 马铃薯葡萄糖琼脂(PDA) 250克
ARB10028 人6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)定量分析 Human 6-keto-prostaglandin f1a,6-k-pgf1a ELISA KIT
ARB13166 小鼠热休克蛋白60(Hsp-60)检测服务 Mouse heat shock protein 60,hsp-60 ELISA KIT
ARB12277 大鼠纤溶酶原激活物抑制因子(PAI)酶联免疫定量检测 Rat plasminogen activator inhibitor,pai ELISA KIT
(不需DNA酶消化)"
ARB10430 人平滑肌肌球蛋白(SMM)elisa检测说明书 Human smooth muscle myosin,smm ELISA KIT
ARB12561 大鼠脂联素(ADP)酶免分析 Rat adiponectin,adp ELISA KIT
芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺 Pronase E 82911-69-1
ARB11236 人细菌性阴道病(BV)ELISA检测服务 Human bacterial vaginosis,bv ELISA KIT
BFD019 克伦特罗（瘦肉*(代"精")）快速检测试剂盒
CYB161036 猪IgG(冻干粉)
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BL1415 "Western blotting(兔IgG)
BL0815 HRP标记羊抗猪IgG抗体
ARB13105 小鼠骨形成蛋白6(BMP-6)免费代测 Mouse bone morphogenetic protein 6,bmp-6 ELISA KIT
SJ0703 胰蛋白酶溶液0.25%

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