两步法耐热RT-qPCR试剂盒厂商

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销售，产品线涵盖两步法耐热RT-qPCR试剂盒厂商在内的分子生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。

名称：两步法耐热RT-qPCR试剂盒厂商
品牌：百奥莱博
英文名：Two steps heat-resistant RT-qPCR Kit
编号：ALH193
本系统由两个试剂盒组合而成。一个是反转录第一链耐热合成试剂盒（ALH268）,一个是2×SYBR Green qPCR Mix（ALH185）。首先由反转录第一链试剂盒合成cDNA，然后以cDNA做模板用2×SYBR Green qPCR Mix进行荧光定量PCR扩增。

储存条件：-20℃。

本品别名：两步法耐热RT-qPCR试剂盒|耐热qRT-PCR试剂盒|两步法耐热荧光定量RT-PCR试剂盒

欲咨询购买两步法耐热RT-qPCR试剂盒厂商，请致电北京百奥莱博科技有限公司，为您提供最全面周到的产品服务，除此之外，我公司正在促销以下产品：

·组织细胞DNA/RNA分离提取试剂盒
编号：ALH023
英文名称：Tissue cell DNA/RNA Extraction Kit
规格：50次
本试剂盒设计用于快速从同一个动物细胞或者组织样品中同时提取分离基因组DNA和总RNA。独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA/DNA酶，然后裂解混合物DNA/RNA同时通过一个基因组DNA吸附柱，基因组DNA被吸附而RNA穿透滤过。DNA吸附柱上基因组DNA经过一系列漂洗-离心后洗脱得到纯净基因组DNA。滤过的RNA用乙醇调节结合条件后，RNA在高离序盐状态下选择性吸附于RNA吸附柱上， 再通过一系列快速的漂洗-离心洗脱得到纯净的RNA。无苯酚、氯*(代"仿")DNA/RNA快速提取技术基础上配合独特的分离技术同时得到的RNA/基因组DNA纯度高，互不干扰。得到的RNA不需要DNase消化，可直接用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。基因组DNA也可以直接用于下游的Southern、酶切、PCR等各种试验。

试剂盒特点：
1.完全不使用有毒的苯酚，氯*(代"仿")等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
2.快速，简捷，单个样品RNA/基因组DNA分离提取操作一般可在40分钟内完成。
3.试剂盒的独特吸附柱和配方确保有效清除基因组DNA残留，一般情况下得到的RNA不需要DNase消化，可直接用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。
4. 多次柱漂洗确保RNA/基因组DNA高纯度，可直接用于下游各种实验。

试剂盒组份(50次)：
裂解液RLT Plus———————————50ml
去蛋白液RW1—————————————40ml
漂洗液RW——————————————10ml
RNase-free H2O———————————10ml
70%乙醇———————————————9ml RNase-free H2O(第一次使用前按说明加指定量乙醇)
抑制物去除液IR———————————25ml
漂洗液WB——————————————15ml
洗脱缓冲液EB————————————10ml
基因组DNA吸附柱和收集管———————50套
RNA吸附柱和收集管——————————50套

注意事项：
1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2. 样品处理量绝对不要超过基因组吸附柱和和RNA吸附柱处理能力，否则造成DNA残留或者产量降低。不同组织细胞种类RNA/DNA相差极大，例如胸腺脾脏DNA含量丰富，超过5mg就会超过柱子处理能力。COS细胞RNA含量丰富，超过3×10^6细胞就会超过柱子吸附能力。所以开始摸索实验条件时，如果不清楚样品DNA/RNA含量时宁可使用较少的样品处理量，如细胞不超过3～4×10^6，组织不超过10mg。将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。
3. 裂解液RLT Plus、抑制物去除液IR、去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4. 预防RNase污染，应注意以下几方面：
1) 经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase 污染。
2) 使用无RNase 的塑料制品和枪头避免交叉污染。
3) RNA在裂解液RLT Plus中时不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4小时，塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10分钟，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase。
4) 配制溶液应使用无RNase的水。（将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC至终浓度0.1%( v/v)，37℃放置过夜，高压灭菌。）
5. 关于DNA的微量残留：
一般说来任何总RNA提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA的微量残留（DNase 消化也无法做到100%无残留），本公司的组织/细胞RNA/DNA分提试剂盒，由于采取了本公司独特的缓冲体系和基因组DNA分离清除技术，绝大多数DNA已经被清除，不需要DNase 消化，可直接用于反转录PCR 和荧光定量PCR。个别特殊情况如DNA含量过于丰富造成残留或者要进行严格的mRNA表达量分析荧光定量PCR，我们建议在进行模板和引物的选择时：
1) 选用跨内含子的引物,以穿过mRNA中的连接区,这样DNA就不能作为模板参与扩增反应。
2) 选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。
3) 将RNA提取物用RNase-free 的DNase I 处理以提高效果。本试剂盒还可以用于DNase I 处理后的RNA清洁(cleanup),请联系我们索取具体操作说明书。
4) 在步骤去蛋白液RW1 漂洗前，直接在吸附柱 上进行DNase I 处理。请联系我们索取具体操作说明书。
6. RNA纯度及浓度检测：
完整性： RNA可用普通琼脂糖凝胶电泳(电泳条件：胶浓度1.2%；0.5×TBE 电泳缓冲液；150v，15分钟)检测完整性。由于细胞中70%-80%的RNA为rRNA，电泳后UV 下应能看到非常明显的rRNA条带。动物rRNA大小分别约为5 kb 和2kb，分别相当于28S和18SrRNA。动物RNA样品中最大rRNA亮度应为次大rRNA亮度的1.5-2.0 倍，否则表示RNA样品的降解。出现弥散片状或条带消失表明样品严重降解。
纯度：OD260/OD280 比值是衡量蛋白质污染程度的参考指标。高质量的RNA，OD260/OD280 读数（10mMTris, pH7.5）在1.8-2.1 之间。OD260/OD280 读数受测定所用溶液的pH 值影响。同一个RNA样品，假定在10mM Tris，pH7.5 溶液中测出的OD260/OD280 读数1.8-2.1 之间，在水溶液中所测读数则可能在1.5-1.9之间，但这并不表示RNA不纯。
浓度：取一定量的RNA提取物，用RNase-free水稀释n倍，用RNase-free水将分光光度计调零，取稀释液进行OD260, OD280 测定，按照以下公式进行RNA浓度的计算：终浓度（ng/μl）= (OD260)×(稀释倍数n)×40。

储存条件：室温，有效期12个月。


两步法耐热RT-qPCR试剂盒厂商关键词：耐热qRT-PCR试剂盒,两步法耐热RT-qPCR试剂盒,两步法耐热荧光定量RT-PCR试剂盒


·miRNA荧光定量PCR检测试剂盒
编号：ALH190
英文名称：miRNA fluorescent quantitative PCR detection kit
规格：50μl×50次
本试剂盒采用SYBR Green I 嵌合荧光法的原理进行miRNA 荧光定量检测。本试剂盒包含miRNA 荧光定量检测的所有试剂，包括2×miRNA qPCR Mix和Reverse primer。2×miRNA qPCR Mix（含Sybr Green）是专门为miRNA 定量检测而研发的新一代预混形式的荧光定量PCR 检测试剂，其中的DNA polymerase 采用的是抗体修饰的热启动形式， 配合特殊的Buffer 体系，使反应特异性更好，灵敏度更高，并能在更广的范围内进行准确定量。（该试剂盒须与miRNA对应cDNA第一链合成试剂盒（ALH189）配套使用。）

试剂盒组分(25次)：
2 x miRNA qPCR Mix(With Sybr Green)———————1.25 ml
Reverse primer(10μM)——————————————55μl

需自备的试剂：
1. 分子生物学实验级别的水（无核酸酶）
2. 待检测miRNA对应的qPCR上游引物（Forward primer）

Forward Primer设计原则：
1. 遵循引物设计的最普遍原则。
2. 以成熟的miRNA 序列为基础，将U替换成T，这是最基础和最简单的设计方法。
3. 试剂盒中提供的下游引物的Tm 值为65℃，设计上游引物的Tm 值要尽量保证在65℃左右。
4. 若按照原则2 的方式直接设计的引物其Tm 值过低，可以在引物的5’端添加几个碱基（最好为G或C碱基）；也可以在’3端添加1 个或几个A 碱基；或者5’端和3’端同时修饰。
5. 若按照原则2 的方式直接设计的引物其Tm 值过高，可以在引物的5’或3’端去掉几个碱基。

注意事项：
1. miRNA 第一链cDNA 的加入量不要超过real time PCR 体积1/10。
2. 对于特殊的检测体系中，高含量的cDNA 模板易导致非特异性扩增，根据所检测miRNA 的丰度适当的稀释cDNA（10倍或者100倍）。
3. 本品中含有荧光染料Sybr Green，I保存本品或配制PCR 反应液时应避免强光照射。
4. 2×miRNA qPCR Mix不含参比染料ROX，客户并根据qPCR仪器技术指导决定是否需要加ROX参比染料，用于消除信号本底以及校正孔与孔之间产生的荧光信号误差。

储存条件：-20℃，有效期6个月。


两步法耐热RT-qPCR试剂盒厂商关键词：耐热qRT-PCR试剂盒,两步法耐热RT-qPCR试剂盒,两步法耐热荧光定量RT-PCR试剂盒


·植物RNA提取试剂盒(含DNA清除柱)
编号：ALH036
英文名称：Plant RNA Extraction Kit
规格：20次|50次
本试剂盒适用于快速提取植物组织细胞总RNA，是在无苯酚、氯*(代"仿")RNA快速提取技术基础上，又采用基因组DNA清除柱技术可以有效清除gDNA残留，得到的RNA一般不需要DNase消化，可用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶，植物RNA助提剂帮助结合多糖多酚并通过离心去除，然后裂解混合物用乙醇调节RNA结合吸附到基因组DNA清除柱，基因组DNA清除柱子同时吸附清除残留的DNA, 然后RNA被选择性洗脱滤过。滤过的RNA用乙醇调节结合条件后，RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜， 再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除， 最后低盐的RNase free H20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

本试剂盒特点：
1.完全不使用有毒的苯酚，氯*(代"仿")等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
2.简捷，单个样品操作一般可在25分钟内完成，世界上最简单快速的试剂盒。
3.独特的植物RNA助提剂可以有效结合多糖多酚，提高清除效果。
4.独特研发成功基因组DNA清除柱技术可以有效清除gDNA残留，得到的RNA一般不需要DNase消化，可用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。
5.适应性极其广泛，可以提取包括棉花、松针、冬青树叶、葡萄叶片、等100多种国内外试剂盒提取失败的样品。详细样品列表请参考公司主页产品介绍。
6.多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.9～2.2，基本无DNA残留,可用于RT-PCR，Northern-blot和各种实验。

试剂盒组份：

组份	20次	50次
裂解液RLT	20ml	50ml
裂解液CLB	8ml	8ml
裂解液RLT Plus	10ml	25ml
去蛋白液RW1	15ml	40ml
漂洗液RW	5ml	10ml
RNase-freeH2O	10ml	10ml
PLANTbalb	2ml	5ml
基因组DNA清除柱和收集管	20套	50套
吸附柱和收集管	20套	50套

注意事项：
1. 所有的离心步骤均可在室温完成（4℃离心也可以），使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2. 需要自备乙醇，研钵(可选)。
3. 样品处理量绝对不要超过基因组清除柱DA和和RNA吸附柱处理能力，否则造成DNA残留或产量降低。开始摸索实验条件时，如果不清楚样品DNA/RNA含量时可使用较少的样品处理量，将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。
4. 裂解液RLT和RLT Plus 和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
5. 关于DNA 的微量残留:
一般说来任何总RNA 提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA 的微量残留（DNase 消化也无法做到100%无残留），本试剂盒RNA提取产品，由于采取了本公司独特的缓冲体系和基因组DNA 清除柱技术，绝大多数DNA 已经被清除，不需要DNase 消化，可直接用于反转录PCR 和荧光定量PCR。个别特殊情况如DNA 含量过于丰富造成残留或者要进行严格的mRNA 表达量分析荧光定量PCR，我们建议在进行模板和引物的选择时：
1) 选用跨内含子的引物,以穿过mRNA中的连接区,这样DNA就不能作为模板参与扩增反应。
2) 选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。
3) 将RNA提取物用RNase-free的DNase I 处理。本试剂盒还可以用于DNase I处理后的RNA清洁，请联系我们索取具体操作说明书。
4) 在步骤去蛋白液RW1漂洗前，直接在吸附柱上进行DNase I柱上消化处理。购买DNA酶柱上消化试剂盒前可先索取具体操作说明书。
6. 仔细阅读补充说明2，如果裂解液CLB效果好，可以联系我们单独订购裂解液CLB，或者购买试剂盒的时候，指明将裂解液RLT换成裂解液CLB。

储存条件：室温，有效期6个月。

我公司正在打折促销核酸扩增(PCR)全系列产品，恭候您的咨询选购两步法耐热RT-qPCR试剂盒厂商。