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  • 货号: P2011/P2012/P2013/P2014/P2015
    PCR Mix
     
    货号 规格 价格
    P2011 1 ml(40次,50 μl体系/次)     120
    P2012 1 ml×5(200次,50 μl体系/次)     500
    P2013 1 ml×10(400次,50 μl体系/次) 800
    P2014 1 ml×50(2000次,50 μl体系/次) 2500
    P2015 1 ml×100(4000次,50 μl体系/次) 4000

    产品组分
    P2011
    2×PCR Mix            1ml    1支
    超纯水                    1ml    1支
    P2012
    2×PCR  Mix        1ml    1支×5
    超纯水                 1ml    1支×5
    P2013
    2×PCR  Mix        1ml    1支×10
    超纯水                 1ml    1支×10
    P2014
    2×PCR  Mix        1ml    1支×50
    超纯水                 1ml    1支×50
    P2015
    2×PCR  Mix        1ml    1支×100
    超纯水                 1ml    1支×100
    注: 本产品分含体系中包含溴酚蓝、不含溴酚蓝两类。体系中包含溴酚蓝的产品,PCR扩增产物可直接电泳检测。这两类产品的扩增性能无差异。如没特别说明提供体系中包含溴酚蓝的包装。
     
    保存条件
      -20℃保存2年。
     请勿保存于-70℃,防止反复冻融导致酶活降低。
     
    产品说明
        PCR Mix是2×浓缩的PCR扩增预混和溶液,含有Taq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液等PCR扩增必需组分(模板与引物除外)。使用时,仅需在扩增
    体系中加入模板和引物即可进行PCR,大大简化操作过程,缩短操作时间,降低污染(加样次数减少)同时,由于体系内含有增强剂,能够显著增强PCR扩增的
    灵敏度。扩增产物具有3’-dA突出端。
    Taq DNA聚合酶是嗜热性细菌Thermus aquaticus来源的热稳定重组型Taq DNA聚合酶,分子量为94 KD。扩增片段的长度可达5 kb(简单模板)。延伸速度为
    0.9-1.2 kb/ min(70-75 ℃)。该酶具有5’→3’聚合酶活性,无3’→5’外切酶活性。
     
    产品特点
    • 使用方便:仅需加入模板和引物即可进行PCR扩增。
    • 快速、高效:减少加样步骤,节约时间。
    • 可重复:降低污染和加样错误风险
     
    产品用途
    • 高通量PCR检测。
    • 高重复性PCR检测。
    • 制备TA克隆用的PCR产物。
     
    活性定义
        一个活性单位(U)指用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,在72℃、30 min内,摄入10 nmol全核苷酸所需的酶量。
     
    质量控制
        相关测试表明无外源内切酶或外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染;PCR方法检测无宿主残余DNA,能有效扩增人基因组中的单拷贝基因;室温放置
    一周,扩增活性无明显改变。
     
    2×PCR Mix(前名Taq Mix)的组分
      100 mM KCl
      20 mM Tris-Cl
      3 mM MgCl2
      0.4 mM dNTP混合物
      0.1 U/μlTaq DNA聚合酶
      溴酚蓝等
     
    应用举例
    注:以下反应举例为50 μl标准PCR体系,仅供参考。实际PCR条件应根据模板、引物结构、目的片段大小加以优化,确定最佳反应条件。(Taq Mix即PCR Mix)
     
    以λDNA为模板,扩增1kb片段。
     λ DNA(2.5 ng/μl)                 1μl
     Primer 1(10μM )                  2μl
     Primer 2(10μM)                   2μl
     2×PCR Mix                            25μl
     dd H2O                        补足至50μl
     
    反应条件
    95℃             3 min
    95℃            30 sec
    55~68℃       30 sec    30 Cycles
    72℃           1~2 min
    72℃             10min


    备注:
    1  建议在冰上配置PCR 反应液后,再放入PCR仪中进行扩增。这有利于提高扩增的特异性,减少非特异性扩增,得到良好的PCR结果。
    2  模板DNA推荐用量(50 μl PCR反应体系)
        人类基因组DNA       0.1 μg ---1 μg
        λDNA                 0.5 ng---5 ng
        质粒DNA             0.1 ng-10 ng
        大肠杆菌DNA         10 ng-100 ng
     
    Q&A
    问:PCR Mix的反应体系与普通Taq DNA聚合酶的反应体系有何不同?
    答:PCR Mix的反应体系中除Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、Mg2+等常规组分外,还包含适当比例的PCR Enhancer与稳定剂。而且,反应体系中的离子种类与
    浓度也有所区别。
     
    问:为什么PCR Mix的灵敏度与扩增效率会高于普通Taq DNA聚合酶?
    答:这是由于东盛对PCR Mix反应缓冲液中的成分与浓度进行了优化。我们在TaqMix反应缓冲液中添加了适当比例的PCR Enhancer,提高了聚合酶的热稳定性,
    显著降低DNA二级结构对于PCR扩增的影响。同时,对PCR Mix反应缓冲液中的离子浓度与比例进行优化,使得聚合酶处于最适活性状态,从而获得了最佳的扩
    增效率。
     
    问:为什么PCR Mix的重复性更好?
    答:这是由于PCR Mix是规模化工业生产,PCR体系组分的浓度与比例一致性好,且减少多种溶液被PCR模板污染的可能性,以及在加样过程中人为造成的误
    差,大大提高了实验的重复性,特别适合高通量与高重复性PCR检测。
    问:PCR Mix的扩增产物能否直接进行TA克隆?
    答:可以直接进行TA克隆。
    温馨提示:不可用于临床治疗。

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