手机验证
2年
东盛生物
大量
-20℃
1 ml×5
PCR Mix
Cat. #:P2011,P2012,P2013,P2014,P2015
产品简介
PCR Mix是2×浓缩的PCR扩增预混和溶液,含有Taq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液等PCR扩增必需组分(模板与引物除外)。使用时,仅需在扩增体系中加入模板和引物即可进行PCR,大大简化操作过程,缩短操作时间,降低污染(加样次数减少)同时,由于体系内含有增强剂,能够显著增强PCR扩增的灵敏度。扩增产物具有3’-dA突出端,可直接用于TA克隆。
Taq DNA聚合酶是嗜热性细菌Thermus aquaticus来源的热稳定重组型Taq DNA聚合酶,分子量为94 KD。扩增片段的长度可达5 kb(简单模板)。延伸速度为1min/kb(70-75℃,简单模板可达10s/kb)。该酶具有5'→3'聚合酶活性,无3'→5'外切酶活性。
产品组成
Component |
P2011 |
P2012 |
P2013 |
P2014 |
P2015 |
2× PCR Mix |
1 ml |
1 ml× 5 |
1 ml× 10 |
1 ml× 50 |
1 ml× 100 |
超纯水 |
1 ml |
1 ml× 5 |
- |
- |
- |
本产品分含体系中包含溴酚蓝、不含溴酚蓝两类。体系中包含溴酚蓝的产品,PCR扩增产物可直接电泳检测。这两类产品的扩增性能无差异。如无特别说明提供体系中包含溴酚蓝的包装。
保存条件
-20℃保存2年。
质量控制
纯度检测:经质量检测,产品不含脱氧核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。
功能检测:PCR方法检测无宿主残余DNA,能有效扩增人基因组中的单拷贝基因。
应用举例
1. 配制反应体系
请于冰上配置反应体系,体系大小与组分用量与添加顺序可调整:
Ordinal |
Component |
Volume (50 μl reaction volume) |
Final concentration (50 μl reaction volume) |
1 |
2× PCR Mix |
25 μl |
1× |
2 |
upstream primer (10 μM)[1] |
2 μl |
0.4 μM |
3 |
downstream primer (10 μM)[1] |
2 μl |
0.4 μM |
4 |
template DNA[2] |
1-4 μl |
<1μg |
5 |
超纯水[3] |
To 50 μl |
- |
optional |
MgCl2(MgSO4)/PCR Enhancer[4] |
Variable |
- |
[1] 引物终浓度建议范围:0.1-1 μM。特异性差时可降低浓度,效率低时可提高浓度。
[2] 不同模板最佳用量不同,部分DNA模板建议用量如下表(50 μl反应体系)。
Template |
人类基因组DNA |
λDNA |
大肠杆菌基因组DNA |
质粒DNA |
Dosage |
0.1μg-1μg |
0.5ng-5ng |
10ng-100ng |
0.1ng-10ng |
[3] 可单独订购超纯水(Cat. #:P9021/P9022/P9023)。
[4] 可单独订购25mM MgCl2(Cat. #:P9031)和PCR Enhancer(Cat. #:P9041)。
2. 设定反应程序进行PCR反应
Stage |
Temperature |
Time |
Number of Cycles |
Initial Denaturation |
94℃ |
3 min |
1 |
Denaturation |
94℃ |
30 sec |
25-35 |
Annealing |
55-68℃[1] |
30 sec |
|
Extension |
72℃ |
Variable[2] |
|
Final Extension |
72℃ |
5-10 min |
1 |
[1] 退火温度应根据Tm值较低的引物来设。
[2] 延伸时间按1min/kb来设最佳(简单模板可达10s/kb)。
3. 分析结果
反应产物可直接进行琼脂糖凝胶电泳,通过凝胶成像设备观察目的条带的扩增情况。如有需要,可进行割胶回收。
无产物或产物量少的改进措施有:1调整退火温度;2减少抑制剂的影响,如提取的基因组DNA中含有抑制扩增的成分,需要高倍稀释(1: 10000)后使用;3采用乙醇沉降洗脱,提高模板DNA的纯度;4使用PCR添加剂,如PCR Enhancer(Cat. #:P9041)、MgCl2(Cat. #:P9031)等可提高产量。
操作注意事项
1 室温下Taq DNA聚合酶有一定的活性,为避免发生非特异性扩增,请于冰上配置反应体系,并且最后添加模板DNA。
2 Taq DNA聚合酶具有脱氧核苷酸转移酶活性,因此在PCR产物3'末端通常会加上1个多余的脱氧腺嘌呤核苷,可直接用于TA克隆。
3 碱基错误率是指在每个碱基合成过程中所掺入的错误核苷酸数目。Taq DNA聚合酶的碱基错误率为1×10-5。
引物设计注意事项
引物长度一般在15-30个碱基之间;上下游引物3’末端避免互补,避免出现3个以上重复的G或C,或出现发夹结构,否则会产生非特异性扩增;GC含量控制在40-60%,且上下游引物GC含量尽量接近;Tm值控制在55-65℃之间,且上下游引物Tm值尽量接近,额外附加序列(酶切位点、修饰等)是非模板匹配序列,不参与Tm值计算。
相关产品
名称 |
货号 |
规格 |
PCR Mix |
P2011/P2012/P2013/P2014/P2015 |
1ml/5ml/10ml/50ml/100ml |
Power Green qPCR Mix |
P2101/P2102/P2103/P2104/P2105 |
1ml/5ml/10ml/50ml/100ml |
1kb ladder |
M1181/M1182 |
50次/250次 |
DSTM5000 |
M1111/M1112 |
60次/300次 |
高纯度质粒小提试剂盒 |
N1011/N1012/N1013 |
50次/100次/200次 |
通用RNA提取试剂盒 |
R1051 |
50次 |
基因组DNA快速提取试剂盒 |
N1111/N1112 |
50次/100次 |
DNA凝胶回收试剂盒 |
N1071/N1072/N1073 |
50次/100次/200次 |
RT-PCR Kit |
R1011/R1012 |
20次/100次 |
更多PCR酶、DNA Marker及核酸提纯类产品请登录东盛生物官网查询。
风险提示:丁香通仅作为第三方平台,为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全,合理判断,谨慎选购商品,商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品,请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
需要更多技术资料 索取更多技术资料
PCR Mix.pdf 附 (下载 19 次)