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线粒体提取
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凯基生物
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文献和实验线粒体是细胞中重要的细胞器,存在于绝大多数生活细胞中,它的主要功能是提供细胞内各种物质代谢所需要的能量。正由于这样,对线粒体膜,呼吸链酶及线粒体DNA等成分的结构,功能以及物理化学性质的研究已经成为细胞生物学研究中的重要课题,所以提取线粒体的技术已经成为线粒体研究中必不可少的手段,线粒体大量存在于代谢旺盛的细胞中,如动物的心肌,肝,肾等器官和组织的细胞中,大量置备线粒体就是从这些器官组织中提取,当所用样品较少时(如电镜和光镜的观察)可采用从组织培养细胞中提取,本实验就是介绍两种材料制备用于光镜
1、做液闪仪测心肌细胞线粒体ANT转运酶活性检测,请问有没有非超声破膜的方法(没超声破碎仪)?2、若提得线粒体,如何看它有没有活性呢,用詹那绿B 就可以么?3、液闪仪大概需要多少样本量?丁香园网友dhh认为:提取新鲜心肌组织细胞内线粒体的方案:1、心肌组织切碎后在4 ℃介质(0.25 mol/L蔗糖、10 mmol/L Tris-HCl pH7.4,0-4℃)中制备心肌组织匀浆。匀浆经750g、离心10 min后留上清,以9000 g离心20 min 后留沉淀,重新悬浮后以9000 g再离心
1、收取细胞。2、PBS洗三遍。3、线粒体BUFFER洗一遍。4、线粒体BUFFER(加PMSF)洗一遍。5、分离BUFFER洗一遍。6、匀浆80次。7、1000G取上清。8、10000G弃上清。9、贴壁物即为线粒体。
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