3ml重力层析空柱

类器官培养与应用——血管类器官

基，放置在 37℃，5％CO2 培养箱中进行培养。   诱导中胚层分化 7、hPSCs 培养 1 天至形成具有平滑边界的聚集体，直径 >50-100 µm 。 8、聚集体形成后，将所有细胞转移至 15ml 离心管中，依靠重力自然沉降（注意：不建议将聚集体离心处理）。静置 15-20min 后，小心吸去培养基上清。 9、将聚集体用 10ml hPSCs 中胚层分化培养基轻轻重悬，加入到低吸附的 6 孔板中，每孔 3ml，放置在 37℃，5％CO2 培养箱中孵育 3 天以诱导中胚层分化，培养期间每天

类器官培养与应用——肠类器官

的 6 孔板中，每孔加入 3ml mTeSR1，放置在 37℃，5%CO2 的培养箱中，培养至细胞融合度约为 75–85%、且大部分无分化的状态时，吸出培养基。 3、向 hPSCs 中加入 1 ml Dispase（1mg/ml），并将培养皿放置在 37℃ 条件下进行解离，直到所有的细胞都以小细胞块或单细胞的形式漂浮。向每个孔中加入 5ml的DMEM-F12，以充分稀释 Dispase。 4、将所有细胞转移至离心管中，室温下 300g 离心 3min，收集沉淀细胞。加入 DMEM-F12 培养

特异性抗体免疫磁珠分选、分离、纯化原代细胞

IgG抗体，4°C孵育30分钟。 
2、用20倍体积PBE洗细胞一次，再加PBE(0.3ml/1×108 细胞)充分混悬细胞后，加入相应二抗包被的超微磁珠，混匀后置8～15°C孵育10～15分钟。 
3、将分离柱安装入磁场中，加入0.5ml PBE，在重力作用下自然流尽，以预处理分离柱。 
 建议：1、分离细胞全过程在超净台中完成。2、超微磁珠及微小磁场系统适合于106 -107 细胞分离。
3、分离柱一般只能一次应用。4、尽量去除死细胞。5、细胞悬液加入分离柱中时，应将滴管伸至底壁后加入，避免将细胞