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胰蛋白酶(Trypin)是一种丝氨酸水解酶,它能把多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基侧切段,水解细胞间的蛋白质,破坏细胞间的连接,从而使组织或贴壁细胞离散成单个细胞。胰酶分散细胞的活性与组织或细胞的特性、胰酶浓度、温度和作用时间有关,在PH 8.0和37℃时,胰酶的作用能力最强,因此使用胰酶时,应把握好浓度、温度和时间,以免消化过度造成细胞损伤。
一般常用胰酶的工作浓度为0.25%,而半贴壁细胞或对胰酶敏感的细胞常采用低浓度(0.05%)的胰酶进行细胞消化。由于EDTA能够螯合Ca2+和Mg2+,从而破坏细胞连接促进细胞的解离,因此在胰酶溶液中常常会加入一定量的EDTA混合使用,以增强解离效果。
产品信息
形态 |
液体 |
规格 |
100mL |
PH |
7.2-7.4 |
溶剂 |
D-Hank's液 |
胰酶蛋白酶浓度 |
0.5g/L |
EDTA•2Na |
0.2g/L |
酚红指示剂 |
无 |
储存条件 |
-20℃ |
运输条件 |
冷冻 |
有效期 |
12个月 |
注意事项
1、由于不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样,因此操作人员应根据实际情况,确定最佳消化时间;消化细胞时间不宜过长,否则会影响细胞贴壁和生长状况;
2、使用本产品时应注意无菌操作,避免污染;
3、不宜长时间放置于室温环境或4℃长期保存;
4、2℃~8℃中解冻,摇匀后使用,切忌反复冻融,用量较少时建议分装冻存。
5、由于D-Hank's平衡盐溶液NaHCO3含量较低(0.35g/L),因此该型胰蛋白酶溶液不能用于5% CO2的环境,若放入CO2培养相,溶液将迅速变酸,使用时应注意;
6、本产品仅用于科研或进一步研究使用,不用于诊断和治疗。
Procell优势
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文献和实验。4、从温箱中取出培养瓶,向瓶底轻轻注入含20%CS及PS的DMEM培养液5ml,然后缓缓翻转培养瓶,让培养液慢慢覆盖附于瓶壁上的组织小块,置于37℃温箱内培养。5、一周后取出培养瓶,弃去瓶内培养液,Hank,s液漂洗两次后加相同的培养液5ml继续培养。以后待细胞萌出后,同样方法每周换液两次。(二)传代培养待原代培养细胞生长基本融合成片时即可传代。1、吸出培养瓶内的培养液,Hank,s液漂洗两次,向瓶内加入0.5%的胰蛋白酶溶液少许以覆盖瓶底为度。2、大约1分钟左右,镜下观察细胞胞质回缩,细胞间隙增大时
摇动使其急速融化,30秒至1分钟内完成。(5)细胞悬液低速离心,去除上清中的保护添加剂,加入原来使用的生长液,置37℃培养。基本设备和试剂设备(略),环境要求清洁、空气干燥和无烟尘。基本试剂培养液:①1640溶于新蒸的三次蒸馏水中,搅拌使其充分溶解,过滤除菌即可。②小牛血清用前56℃X30分钟灭活(破坏补体)分装置-20℃保存备用。③青链双抗液将100万单位的青霉素钠盐和硫酸链霉素用高压2次后的三蒸水100ml充分溶解,分装冻存于-20℃,使用前融化,每100ml生长液中加1ml,即使用终浓度为含
,Rb,TopoismeraseⅡ 等。 2、酶消化方法 常用 0.1% 胰蛋白酶和 0.4% 胃蛋白酶液。胰蛋白酶使用前预热至 37℃,切片也预热至 37℃,消化时间约为 5~30 分钟(胰酶的最终浓度可以根据使用者的要求进行调整,浓度范围可以从 0.05% 至 0.25% ); 胃蛋白酶消化37℃ 时间为 30 分钟。皂素(Saponin):一般使用浓度为2~10mg/ml的saponin 溶液,消化时间为室温孵育 30 分钟。 适用于被固定遮避的抗原,其中有:Collagen
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