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- 2025年07月08日
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文献和实验问：请问哪位仁兄能告知一下EDTA-胰蛋白酶的配制。急用！多谢！答：1、胰酶是0.25%,这是质量体积比，就是说0.25g胰酶溶于100ml PBS,注意，尽量不要用水来溶，因为要保持渗透压。2、EDTA的工作液溶度是0.02%－0.1%，根据细胞消化的难易程度自己调整。EDTA并不是必须的，容易消化的细胞可不加。EDTA对细胞贴壁性有影响，因此使用时要甚重。如果影响贴壁，但消化时必须要用，那么在用完全培养基终止消化后，可离心弃上清，再加完全培养基培养，可去除EDTA。如果对贴壁没
干净； 将组织置于平皿中，用眼科剪刀剪成小颗粒（1~2 mm3）； 加入 30 倍组织量的蛋白酶溶液（0.1% 胰蛋白酶和 0.02%EDTA 等比混合）； 移液管转至三角烧瓶，置于37℃水浴或者恒温箱中消化 20~60 min，每隔5~10 min震荡一次。若需消化较长时间，可每隔 15 min 将 2/3 的消化上清液转移到离心管中冰浴或离心去除消化液，加入含血清培养基终止消化，另补充新的消化液至三角烧瓶中继续消化； 将消化液或分批收集的细胞悬液经 200~300 目的滤网过滤，300 g
，在0.1毫升细胞悬液中加0.1毫升0.4%的台盼兰溶液。轻轻混匀，数分钟后，用血球计数板计数细胞。活细胞排斥台盼兰，因而染成蓝色细胞是死细胞。 34. 培养基中丙酮酸钠的作用是什么？ 丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是，如果没有葡萄糖的话，细胞也可以代谢丙酮酸钠。 35. 二价离子抑制胰蛋白酶活性吗？使用胰蛋白酶时加入EDTA的目的是什么？ 二价离子的确抑制胰蛋白酶活性。EDTA用来螯合游离的镁离子和钙离子
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