淋巴细胞分离液1.077 细胞生物学试剂

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淋巴细胞分离液1.077 细胞生物学试剂由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于生化科学研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多淋巴细胞分离液1.077等细胞分离液产品请联系我司咨询订购。

名称：淋巴细胞分离液1.077 细胞生物学试剂
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
编号：SY0532
淋巴细胞分离液（Lymphocyte Separation Medium，简称LSM）是一种无菌的即用型分离液，基于Böyum的Ficoll-甲泛影钠溶液做过一些改良，使得操作简单快速且分离效率更高。每100 ml淋巴细胞分离液中含有6.2 g 聚蔗糖（Ficoll）和9.4 g 泛影酸钠，20℃下的密度为1.0770-1.0800 g/ml。不仅适用于外周血淋巴细胞，也可分离其他组织来源的淋巴细胞，包括脐带血和骨髓细胞。

工作原理
去纤维蛋白或肝素化人血以1：1的比例用生理盐水或平衡盐溶液稀释，加在分离液上层，之后低速离心30 min。在离心过程中，差速迁移使其最终形成几个细胞分层。聚集在管底的颗粒主要是红细胞和多形核粒细胞，通过梯度迁移至管底。根据其密度的大小，淋巴细胞和其他单个核细胞如单核细胞，以及血小板分布在血浆和LSM两层之间。淋巴细胞可以通过吸取分界层溶液回收，并通过进一步清洗来去除血小板，LSM和血浆。

操作方法
注：此操作流程适用于去纤维蛋白或抗凝血剂处理过的人血。对于其他物种或者其他组织的血液，可能需要对此步骤做出一定的改进。



1）轻轻颠倒瓶子使LSM充分混合；
2）无菌条件转移3 ml LSM到15 ml离心管中；
3）用2 ml 生理盐水混合2 ml去纤维蛋白血液或肝素化血液；
4）小心将稀释血液加入3 ml LSM（室温即可）的上层，使得在血液和LSM间形成一个明显的分层。不要将稀释血液混入LSM中；
5）室温下400g离心15-30min，离心可以沉淀红细胞和多形核白细胞，同时可以在LSM上形成一层单核-淋巴细胞分层，如下图所示（从上到下，依次分为血浆层-淋巴细胞层-LSM层-RBC颗粒）；
6）吸出淋巴细胞层上方2-3 mm内的血浆；
7）吸取淋巴细胞层以及它下面一半的LSM层，并转移到另外一个离心管。加入等体积的平衡盐缓冲液至离心管内的淋巴细胞层中，室温离心10 min，离心速度设定在既不损伤细胞又能沉淀细胞的范围，例如160 – 260 g（清洗去除LSM和降低血小板含量）；
8）用平衡盐缓冲液再清洗细胞一次，最后取适当的培养基重悬细胞。

注意事项
1）稀释去纤维蛋白血液或肝素化血液用的生理盐水为无菌液体。
2）为保持淋巴细胞的活性，应该采血后尽快进行分离。分离细胞层实际上是单个核细胞层，包括淋巴细胞和单核细胞。
3）若溶液变浑浊，呈现出不同的黄色或可能有受污染迹象，不可再使用。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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·一步法快速克隆试剂盒
编号：SY0285
英文名称：Plus One Step Cloning Kit
规格：25T
本试剂盒是一款简单、快速、高效的DNA定向克隆产品，该试剂盒可以将PCR产物定向克隆至任意载体的任意位点，可高效克隆50 bp～10 kb片段。将载体在克隆位点进行线性化，并在插入片段PCR引物5’端引入线性化克隆载体末端序列，使得插入片段PCR产物5’和3’最末端分别带有和线性化克隆载体两末端对应的完全一致的序列 (15bp～25bp)。将这种两端带有载体末端序列的PCR产物和线性化克隆载体按一定比例混合，在重组酶的催化下，仅需反应15 min即可进行转化，完成定向克隆。克隆阳性率可达95%以上。克隆载体酶切产物或PCR产物和插入片段PCR产物可以不进行DNA纯化直接用于重组克隆，极大的简化了实验步骤。

试剂盒中2×Enzyme Premix预混了重组酶和重组反应所需缓冲液，并添加了独特的重组增强因子，可显著提高重组克隆效率，即便使用低效率感受态细胞 (107cfu/μg)也可实现高效克隆 (100cfu/ng Vector)，重组体系还兼容常规酶切、PCR反应体系。

产品用途：该试剂盒可用于快速克隆、高通量克隆、无缝克隆和DNA定点突变。

产品组份：
2×Enzyme Premix————250μl
500 bp control insert(30ng/μl)————5μl
pUC 19 control vector, linearized (50ng/μl)————5μl

储存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期一年。

实验流程概览:

1）线性化克隆载体制备；
2）插入片段扩增引物设计；
3）插入片段PCR扩增；
4）进行重组反应；
5）反应产物转化、涂板；
6）克隆鉴定。




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·细胞膜深红色荧光探针
编号：SY0584
英文名称：DiR Iodide (DiIC18(7))
规格：25mg
DiI，DiO，DiD，DiR是一系列亲脂性的荧光染料，可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构。这些环境敏感性荧光染料在进入细胞膜之前荧光非常弱，当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强。且具有消光系数高、极性依赖性、激发态寿命短等特点。一旦进入细胞膜后，可在整个细胞膜上扩散，最佳浓度时可以使整个细胞膜染色。不同的荧光染色（DiI:橙色荧光; DiO:绿色荧光; DiD:红色荧光; DiR: 深红色荧光）为活细胞多标、流式分析提供了便利：
1）DiO和DiI可分别用标准的FITC滤光片和TRITC滤光片检测。
2）DiD是DiI的衍生物，具有明显往红光迁移的激发和发射光谱，这一特性使其特别适合标记具显著自荧光效应的细胞或组织。
3）DiR具强效的近红外光穿透细胞或组织，并在近红外区具较低的自荧光水平，这些特性使其特适用于体内成像或示踪实验。

分子式：C63H101IN2
分子量：1013.39
外观：蓝色固体
Ex/Em：748nm/780nm
推荐滤光器：XF112-Omega, 41009-Chroma
纯度：＞97%（TLC）
溶解性：溶于DMF，DMSO，甲醇
储存条件：-20℃避光干燥，有效期24个月
结构式


·溶壁酶(10U/μl)
编号：SY0003
英文名称：Lyticase (10U/μl)
规格：1500U
溶壁酶（Lyticase）是真菌细胞溶解酶的简称，普遍用于需要水解酵母细胞壁的下游实验，包括基因组研究，酵母人工染色体（YACs）提取，酵母转化，原生质体制备，酵母细胞破碎，工业生产，酵母失活等。本品为溶液型的溶壁酶，浓度为10U/μl，常用的工作浓度是0.15U/μl。一般根据具体的实验应用，酵母类型和细胞量来优化最佳的工作浓度。对于酵母基因组DNA/质粒DNA提取，可以按照试剂盒内的浓度来工作。
储存条件：-20 ℃。


淋巴细胞分离液1.077 细胞生物学试剂关键词：淋巴细胞分离液1.077,SY0532,Lymphocyte Separation Medium 1.077


·腔肠素e
编号：SY0241
英文名称：Coelenterazine e
规格：1×500μg
本品为粉末形式供应的腔肠素e（Coelenterazine e），一种天然腔肠素衍生物，结构上比天然腔肠素多了一个乙基。作为海肾荧光素酶的底物，其荧光强度是天然腔肠素的137%。腔肠素e具有最高的体外水母发光蛋白反应性，且具有双发射峰（405& 465），从而可在pCa 5-7范围内通过双波长的比例测定Ca2+浓度，由于该法不依赖于腔肠素浓度，因此提高了检测精确性。但对于细胞内相关实验则无此优势，因为该衍生物的细胞通透性较差。

腔肠素（Coelenterazine）是自然界中资源最丰富的天然荧光素，是绝大多数海洋发光生物（超过75%）的光能贮存分子。腔肠素可作为许多荧光素酶的底物，比如海肾荧光素酶（Rluc），Gaussia分泌型荧光素酶（Gluc），以及包括水母发光蛋白（aequorin）和薮枝螅发光蛋白（Obelia）在内的光蛋白（Photoproteins）。其发光原理是：以腔肠素为底物的荧光素酶在有分子氧的条件下，氧化腔肠素，产生高能量的中间产物，并在此过程中发射蓝色光，峰值发射波长约为450~480nm。与甲虫（或萤火虫）荧光素/荧光素酶系统不同，腔肠素/荧光素酶系统不需要三磷酸腺苷（ATP），因此更便于体内生物荧光的研究。因此，腔肠素常用作基于荧光分析的报告基因检测以及活体动物检测的发光底物。

腔肠素还能在酶非依赖性的氧化体系中自发荧光，细胞和组织内的超氧阴离子和过氧化亚硝基阴离子能够增强该自发光信号，因此其也可用来检测细胞/组织内活性氧（ROS）水平。

腔肠素具有能量转移的特性— —生物发光共振能量转移（Bioluminescence Resonance Energy Transfer，BRET），利用此特性，当与荧光蛋白如GFP的突变体（增强的黄色荧光蛋白，EYFP）联合使用，在底物腔肠素存在的情况下，荧光素酶（如Rluc）催化底物发生蓝光，能量随之转移到EYFP上，发出绿光（~530nm）。这两个蛋白的相互作用可以通过Rluc融合蛋白和EYFP融合蛋白两者间的相互关系来评估，适用于研究蛋白-蛋白之间的相互关系。另外，由于BRET的信号可通过比较绿光和蓝光的量来进行测定，消减了因细胞数、细胞类型和其他实验变量而引起的数据变量，适用于高通量筛选如药物开发。

更为重要的一个功能，水母发光蛋白复合物（Aequorin）由22kDa的水母蛋白（Apoaequorin protein）、分子氧和底物腔肠素组成。只有当钙离子（Ca2+）与该复合物结合后，腔肠素才能被氧化生成高能量产物Coelenteramide，同时释放出CO2和蓝色荧光（~466 nm）。正是此Ca2+依赖性的反应过程（见图1），使得腔肠素非常适用于监测活细胞内钙离子水平。与常规的荧光钙离子指示剂相比，其主要具有以下几个优点：
1）能检测较大范围的钙浓度 – 从0.1 μM至 >100μM
2）样品无自体荧光，背景荧光低于使用荧光钙离子指示剂；虽然信号比使用荧光钙离子指示剂弱，但是通过成像仪器可以得到更高的信噪比，因此具有更高的灵敏度。
3）水母发光蛋白复合体能够稳定维持在细胞内，使其能够进行数小时至数天的钙离子监测。



图1. 腔肠素作为水母发光蛋白辅助因子的Ca2+依赖反应流程

目前商业化的腔肠素应用最普遍的是天然腔肠素（Coelenterazine native），另外还有很多腔肠素衍生物如Coelenterazine h、Coelenterazine 400a、Coelenterazine cp、Coelenterazine f、Coelenterazine hcp、Coelenterazine n等被一一合成。理论上这些腔肠素可用于相同的实验，但是由于其发光波长，细胞膜渗透性，光量子效率上的差异，使得其在相同应用上表现出不同的实验效果。因此非常有必要根据具体实验目的选择最合适的腔肠素底物。

英文别名：e-CTZ; e Coelenterazine
CAS：114496-02-5
分子式：C28H23N2O3
分子量：449.5
溶解性：溶于甲醇或者乙醇，不溶于DMSO
外观：黄色至橘色固体
纯度：≥95%（TLC）
结构：


注意事项
1） 腔肠素e粉末最好使用惰性气体-氮气或氩气，在密封良好的塑料管中避光保存于-20℃，长期保存于-70℃。管内即使有少量空气进入，也可能造成腔肠素e氧化失活，使量化分析的结果难以在不同试验间进行比较。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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