ADP/ATP发光法细胞活力检测试剂盒

ADP/ATP发光法细胞活力检测试剂盒产品及特点
ATP生物发光技术的原理是荧光素酶（Luciferase）以荧光素（Luciferin）、三 磷酸腺苷（ATP）和O2为底物，在Mg2＋存在时，能将化学能转化为光能。ATP既是 荧光素酶催化发光的必需底物，又是所有生物生命活动的能量来源。在荧光素酶催化 的发光反应中，ATP在一定的浓度范围内，其浓度与发光强度呈线性关系。 研究表明，各生长期的细菌均有较恒定水平的ATP含量，因此，提取细菌的ATP， 利用生物发光法测出ATP含量后，即可推算出样品中的含菌量，整个过程仅为十几分 钟。由于生物发光法无需培养微生物过程，操作简便、灵敏度高，在短时间内即可得 到检测结果，具有其他微生物检测方法无可比拟的优势，是目前检测微生物最快的方 法之一。 本试剂盒采用生物发光（bioluminescent）法，利用Firefly luciferase（萤火虫 荧光素酶）催化底物Luciferin（荧光素）的转化，高效利用ATP的能量，发射出光 子。发光信号与存在的ATP量呈正比，而ATP与存在于培养基中的细胞数目直接呈正 比。ATP的检测灵敏度达到10-13 ，故具有极高的敏感性。本试剂盒首先利用荧光素 酶反应体系，测定样品中ATP的发光值，然后用ATP转换酶将ADP转化成ATP，再次 利用同样的发光体系，测定样品中ADP转化所得的发光值。获得的结果可提供样品中 ADP和ATP的相对含量及其变化，从而了解酶促反应的进程或细胞状态的改变。该产 品特点如下：
1. 高度敏感：灵敏度达到10-13
2. 快速简便：适合高通量筛选
ADP/ATP发光法细胞活力检测试剂盒使用及效果
收取细胞提取ATP，在孔/皿中加入足量1x细胞裂解液裂解。裂解细胞含量较多 时，可将样品用双蒸水稀释，以保证在测定ATP 的线性范围内。按20/1 比例用ATP 反应缓冲液稀释荧光素，再加入1/10 体积的荧光素酶，配制成发光反应液。取待测 样品5μL加入测量管底部，取发光反应液 50μL加入管底部，轻轻敲击管壁3~5次混 匀，放入仪器中立即测定，记录发光值为荧光素酶催化的发光单位(RLU) 。加入ATP 转化酶，测定RLU。