Caspase 8检测试剂盒

Caspase 8检测试剂盒产品及特点
Caspase（Cysteine-requiring Aspartate Protease）家族在介导细胞凋亡的 过程中起着非常重要的作用。Caspase 8（FLICE；MACH；Mch5）通常以酶原的 形式存在，在细胞凋亡的信号转导过程中被激活。Caspase 8被认为是细胞凋亡信 号转导过程中比较上游的一个Caspase，在Fas-receptor和TNFR-1介导的细胞凋亡 过程中caspase 8被激活，形成一个由p18和p10组成的二聚体，进一步激活下游的 Caspase 4，Caspase 6，Caspase 9和Caspase 10。本产品是基于底物Ac-IETDpNA(acetyl-Ile-Glu-Thr-Asp p-nitroanilide)的Caspase 8分光光度法检测试剂 盒，可用于检测细胞或组织裂解液中Caspase 8活性或纯化的Caspase 8活性。
Caspase 8检测试剂盒使用及效果 裂解样品：
1. 细胞样品 收集3-5×106 个细胞，向细胞中加入150-200 μL预冷的溶液A（裂 解液，每50 μL溶液A提前加入0.5 μL溶液D），冰上静置20-60 min，期间振荡3-4 次。4℃，10000 rpm离心1分钟。转移上清至新离心管，取少量上清测定蛋白浓度 （Bradford法）。
2. 组织样品 取50-100 mg组织样品，剪碎至3mm×3mm大小，加入150-200 μL预冷的溶液A（每50 μL溶液A提前加入0.5 μL溶液D），匀浆器匀浆。匀浆液转移 至预冷的离心管中，4℃，1000rpm离心5分钟。转移上清至新离心管，取少量上清 测定蛋白浓度（Bradford法）。 Caspase 8检测 取50 μL 含100-200 μg蛋白的细胞或组织裂解液上清，体积不足50 μL的，用 10mM PBS（pH7.2~pH7.6）补足体积至50 μL。加50 μL溶液B（每50 μL溶液 B提前加入0.5 μL溶液D）。加入5 μL溶液C，37℃避光孵育4小时。酶标仪或分光 光度计405nm测定吸光值。通过计算OD诱导剂/OD阴性对照的数值来确定凋亡诱导剂组 Caspase 6的活化程度。