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- KALANG
- 中国大陆
- KL0284
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃，避免反复冻
- 保质期：
长期
- 英文名：
Zero TOPO-Blunt Simple Cloning Kit
- 库存：
大量
- 供应商：
康朗生物
- 规格：
20T
零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒(不含MCS多克隆酶切位点)
编号：KL0284英文名：Zero TOPO-Blunt Simple Cloning Kit
规格：20T
本试剂盒是利用拓扑异构酶（Topoisomerase）高效快速连接DNA*(代"片")段的原理进一步研发而成，与传统的T4连接酶相比，具有以下优势：
1）快速，仅需1-5分钟即可完成连接反应。
2）高效，无自连现象，阳性克隆率接近100%，无需设置蓝白斑筛选；
3）操作简单，从连接到涂板仅需15-20min。操作过程省去冰浴、热激和1h复苏。
4）可连接长达10kb目的产物；
5）本产品不含多克隆酶切位点（MCS），使用者在引入后续酶切位点进行酶切操作时，不会受到MCS位点的影响，从而增加酶切效率以及克隆成功率。
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文献和实验Blunt PCR克隆乃利用传统T4连接酶方法，但载体和Topo平端的一样，含ccdB基因，所以同样可降低菌落背景，易于筛选。 表10 PCR克隆试剂盒的选择 Amplification Enzyme Application of Cloned PCR Product Ligation Method Product
PCR Cloning Kit）（Topo XL PCR Cloning Kit） 因为越来越多高确限度热稳定酶如Pfx、Pfu被用于PCR 扩增，使到PCR 后都只是平端产物。这种平端克隆 往往效率低，并且有非特异性背景菌落产生，造成筛选困难。 Topo平端克隆 主要改良载体设计，把ccdB （Control of cell death）基因并入到mcs中，如果没有DNA片断插入，ccdB基因则会表达
本领。 经典分子克隆技术vs无缝组装克隆技术 技术总是随着时间向前发展的，由难到易，化繁为简，将不能变为可能。分子克隆技术的发展完美体现了这一点。 以构建表达载体为例，经典分子克隆中，要将目标片段插入载体，全靠内切酶的拆分和连接酶的拼接。关键是选择合适的酶切位点，使得酶切“拆”得的目标片段末端和相应载体末端正好能互补“拼”在一起，连接酶才能连起来。选择酶时首先不能破坏目标基因完整性（包含从起始密码到终止密码）及载体完整性；其次，尽量避免选两个酶切生成粘端一样的（粘端互补）——两边粘端一样的载体“偏爱
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