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- 2025年07月15日
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- 文献和实验
- 技术资料
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-20℃
- 保质期：
长期
- 英文名：
N-Flag plasmid（with CMV promoter）
- 库存：
大量
- 供应商：
康朗生物
- 规格：
1μg
N端Flag标签融合蛋白质粒
英文名：N-Flag plasmid（with CMV promoter）本质粒是用于在哺乳动物细胞中表达N端和Flag tag(Flag标签)融合的目的蛋白的表达质粒。含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达；在多克隆位点的5"端含有一个可以编码Flag标签的序列，因此可以表达出含有Flag标签的融合蛋白，可以方便地使用抗Flag的抗体来识别目的蛋白，有利于目的蛋白检测和分离纯化。质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后，可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
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文献和实验出来，可能两个原因，第一个是抗体不好，第二个可能是质粒没做好，发生移码了，因为你用的是pEGFP-N2载体，gfp是在n端，就算发生了移码一样可以检测到绿色萤光，仔细检查下你做的质粒看看是否正确。 liuruya 谢谢大家的回复 1.WB应该是没有技术问题，用的是GFP或flag的标签抗体，而且设置了之前做过的基因做阳性对照 2.GFP质粒测序过是完整的且没有移码，flag的是自己构建的也反复check过没有问题 觉得很妖怪 问了当时给我质粒
被遮蔽，从而干扰相互作用。因此，通常构建质粒的时候是N端、C端tagged同时分别构建，以备万一。 内源性蛋白的相互作用，主要依靠抗体IP，WB或者质谱分析。另外一条途径，是用外源性蛋白的coIP指代内源性蛋白，上文提到的tandem-tag技术的目的就是为了实现这种可能。它的核心是将外源性蛋白的过表达降低极低水平用于模拟体内环境。 实际上，在构建外源过表达体系的时候，通常可以得到一系列表达水平差异的稳定单克隆，可以通过进一步筛选获得外源与内源相加与原内源蛋白水平相当的细胞株（在细胞调控承受的范围
也可以，这样用一个启动子CMV同时表达两个蛋白，而不是融合蛋白。 liuyicheng84427 VEGF应该加在GFP的N端还是C端？ lmnsmu VEGF加在GFP的N端或C端均可以，而且有一些载体如pEGFP-N1或pEGFP-C1在N端或C端已经有GFP的序列，只需将你的目的基因序列插入到MCS区即可融合表达。 naj2007 多谢大家！ hiqihong
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