- ¥190 - 1980
- KALANG
- 中国大陆
- KL0282
- 2025年07月12日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃，避免反复冻
- 保质期：
长期
- 库存：
大量
- 供应商：
康朗生物
- 规格：
20T
零背景TOPO-TA克隆试剂盒(不含MCS多克隆酶切位点)
编号：KL0282规格：20T
本试剂盒是利用拓扑异构酶（Topoisomerase）高效快速连接DNA*(代"片")段的原理进一步研发而成，与传统的T4连接酶相比，具有以下优势：
1）快速，仅需1-5分钟即可完成连接反应。
2）高效，无自连，阳性克隆率接近100%，无需设置蓝白斑筛选；
3）操作简单，从连接到涂板仅需15-20min。操作过程省去冰浴、热激和1h复苏。
4）可连接长达10kb目的产物；
5）本产品不含多克隆酶切位点（MCS），使用者在引入后续酶切位点进行酶切操作时，不会受到MCS位点的影响，从而增加酶切效率以及克隆成功率。
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文献和实验后都只是平端产物。这种平端克隆往往效率低，并且有非特异性背景菌落产生，造成筛选困难。Topo平端克隆主要改良载体设计，把ccdB （Control of cell death）基因并入到mcs中，如果没有DNA片断插入，ccdB基因则会表达，ccdB基因的表达蛋白，会破坏细菌的DNA gyrase，造成细菌染色体的降解导致细菌死亡。如果有插入片断，则ccdB基因表达受到阻碍，所以细胞可生长。这样可以把高背景的缺点改善，节省筛选的时间。Topo平端克隆与Topo TA方法一样，操作简单快速。Zero
PCR Cloning Kit）（Topo XL PCR Cloning Kit） 因为越来越多高确限度热稳定酶如Pfx、Pfu被用于PCR 扩增，使到PCR 后都只是平端产物。这种平端克隆 往往效率低，并且有非特异性背景菌落产生，造成筛选困难。 Topo平端克隆 主要改良载体设计，把ccdB （Control of cell death）基因并入到mcs中，如果没有DNA片断插入，ccdB基因则会表达
℃，而拓扑异构酶I则偏爱室温。这个室温是指22-23℃，应特别注意。很多时候我们实验室的室内温度并不满足条件。TOPO克隆得到的菌落可能不如TA克隆多，不过质量高，95%左右都是重组子。价格约为5748元/20次，时间就是金钱，这下体会到了吧。 如果你用的是高保真酶，你可以选择在PCR之后加A，或者你直接选择平端克隆试剂盒。由于载体会自连，所以平末端克隆的背景会很高。为了避免这个问题，Invitrogen开发了Zero Background(零背景)技术，用在TOPO载体上。这个技术
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