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- KALANG
- 中国大陆
- KL062
- 2026年09月16日
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GoldStar TaqMan Mixture(dUTP+UNG酶)
编号：KL062规格：1ml
产品介绍:
2×GoldStar TaqMan Mixture(dUTP+UNG 酶)是专用于探针法(TaqMan,Molecular Beacon等)实时荧光定量PCR的预混体系,浓度为2×,包含 GoldStar Taq DNA polymerase、PCR Buffer、dNTPs(dTTP全部被dUTP所取代)、UNG酶和Mg2+,操作简单方便。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后的cDNA靶序列的检测,如基因表达分析,拷贝数分析,SNP基因型分析等。本产品中运用了dUTP-UNG防污染系统,在PCR反应体系配制过程中加入了dUTP,因此就形成了含有dU碱基的扩增产物。而此产物可以在下次进行PCR反应前,由PCR体系中的UNG酶处理消除。这样就有效的去除了PCR产物的残留污染,大大降低了由于扩增产物污染而导致的假阳性。UNG酶在PCR循环中的预变性步骤即可被灭活,因此不会影响新的含dU碱基PCR产物的形成。本品含有的 GoldStar Taq DNA Polymerase是一种经化学修饰的、全新高效热启动酶,在常温下没有聚合酶活性,有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增,酶的激活须在95℃下孵育10分钟。独特的 PCR缓冲体系与热启动酶的组合,显著提高了PCR的扩增效率,荧光信号更强,灵敏度更高,可以检测单拷贝的模板。使用本产品可以得到更广的线性范围,对目的基因定量更准确。
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文献和实验」和「扩增区」分割开 PCR 体系配置和 PCR 扩增实验。如果不具备这样的条件，首先要避免荧光定量 PCR 实验结束之后开盖，以防扩增产物形成气溶胶对后续实验造成污染。少量意外开盖不能避免时，可以使用含有 UNG 酶（uracil-N-glycoslyase, 尿嘧啶 DNA 糖基化酶）的扩增预混液。如果在 PCR 反应中以 dUTP 代替 dTTP 参入到 PCR 产物中，形成了含有 dUTP 的扩增产物，UNG 酶能选择性断裂单链和双链 DNA 中 U 碱基的糖苷键， 降解 PCR 扩增
酶（如Msp I和Taq I等），可同时选择几种，以克服用一种酶只能识别特定序列的缺陷，室温作用1h 后加热灭活进行PCR； 3、紫外照射法：未加模板和Taq聚合酶的PCR混合液进行紫外照射，注意事项与方法同上述UV照射法； 4、g射线辐射法：1.5kGy的辐射可完全破坏0.1ng基因组DNA，2.0 kGy可破坏104拷贝的质粒分子，4.0 kGy仍不影响PCR，但高于此限度会使PCR扩增效率下降。引物可受照射而不影响PCR，g射线是通过水的离子化产生自由基来破坏DNA的。（三）尿嘧啶糖苷酶（UNG
及修改PCR热循环程序：在ABI公司默认的程序中，50℃ 2 min是UNG酶起作用的步骤，UNG酶可以预防PCR产物（其中以U代替T）对定量PCR的污染；95℃ 10 min的作用是激活金牌Taq酶，同时灭活UNG酶；40个循环的95℃15sec和60℃1min是定量PCR的循环步骤。7000默认在最后一步，也就是60℃1min复性和延伸时收集荧光信号。如果使用ABI公司的定量PCR试剂，上述参数不需要调整，直接运行PCR循环就可以了。在使用其他厂家试剂的情况下，如果其中没有UNG酶，请删除50
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