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康朗生物
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5000U(20μl×25次)|20000U(20μl×100次)
TIANScrip MMLV
规格:5000U(20μl×25次)|20000U(20μl×100次)编号:KL196
BalbScri: pt M-MLV 是由一个71kDa 的单亚基组成的逆转录聚合酶。可以催化以RNA或DNA/RNA杂交链为模板的互补DNA的聚合反应。该酶浓度为200 U/ μl。
产品特点:
RNaseH 的活性弱化,可最大限度保护RNA 模板。
可扩增更长的RNA模板,cDNA 产量更高。
酶性能稳定。
保存条件:
-20℃
产品应用:
第一链cDNA合成
cDNA 文库构建
一步法RT-PCR
引物延伸
3′和5′RACE等
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文献和实验流程、简单的处理步骤和较少的 RNA 损伤。可选择在反转录前使 ezDNase 酶失活,因为酶不会切割引物、ssRNA 或 cDNA:RNA 复合物。 三、反转录酶选择 反转录酶以 RNA 为模板合成 cDNA,但这一类反转录酶可能具有不同的功能活性和性质。它们的性质会影响其反转录长链 RNA、高 GC 含量 RNA、具有复杂二级结构的 RNA 和不纯 RNA 的能力。 分子生物学中使用的大多数反转录酶来源于禽成髓细胞瘤病毒(AMV)或莫洛尼鼠白血病病毒(MMLV)的 pol 基因。AMV 反转
糖凝胶电泳,若胶图上只有 28sRNA、18sRNA 和 5.8sRNA 三条单一的条带,说明提取的 RNA 完整度良好。如果出现拖带的现象,表示 RNA 部分降解。2、若胶孔和 28sRNA 条带之间出现单一明亮的条带,表示可能有基因组 DNA 残留。3、若胶孔内出现条带,说明可能有蛋白等大分子物质残留。逆转录RNA 提取完成后,需要反转成 cDNA 才能进行后续实验,所以反转步骤是必不可少的。逆转录将从逆转录酶的选择和引物的选择进行介绍:逆转录酶的选择:常见代表性反转录酶有 AMV RTase 和 MMLV
强度,然后对模板的浓度作图。因为内参照与特异的mRNA在同一体系中的共同扩增效率在PCR对数期内是相同的,因此,可用标准曲线对特异mRNA进行定量。现以质粒AW108cRNA为内参对照来确定Jurkat细胞诱导产生的IL-2 mRNA量为例。 材料与试剂 1. RNA提取所需试剂与材料 2. MMLV逆转录酶 3. 32 P末端标记引物(IL-2引物序列见第九章,放射性标记见第四章相应内容) 4. dNTP,Tag DNA
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