- ¥190 - 1980
- KALANG
- 中国大陆
- KL198
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
冷藏
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长期
- 库存：
大量
- 供应商：
康朗生物
- 规格：
20μl×25次|20μl×100次
TIANScript Ⅱ RT Kit
规格：20μl×25次|20μl×100次编号：KL198
产品简介： 本试剂盒提供了所有的用于cDNA第一链合成的试剂，其中的TIANScriptⅡRTase为改良后的莫洛尼氏鼠白血病病毒反转录酶（M-MLV），改良后的新RTase具有更高的模板亲和力和更低的RNase H活性，因此使其在cDNA第一条链的合成过程中具有通读复杂二级结构模板和反转录长片段cDNA的能力。产品中配备的5×TIANScriptⅡRTase Buffer经过精心的优化，既保证了新型RTase的高效酶活，又拓宽了RNA模板量的加入范围，使得反转录出来的cDNA具有更好的质量以便用于后续的实验分析。 产品特点： 酶活效率高：高效的逆转录酶活性，后续实验兼容性好。 底物范围广：适用于所有RNA，尤其是具有复杂二级结构的RNA模板。 反转片段长：cDNA第一链合成可以达12 kb。 适用范围： 1. cDNA第一链的合成； 2. cDNA文库的构建； 3. 一步法RT-PCR； 4. RACE分析。 注意事项：请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。 1. 用于cDNA合成反应的溶液试剂尽可能用DEPC进行处理，并在高压灭菌后使用。有些试剂不能高压灭菌时，首先用经过灭菌的器具、水等配制溶液后，再将溶液进行滤除菌处理。 2. RNA样品要避免基因组DNA污染； 3. 避免反复冻融RNA，使RNA保持在冰浴中处融化状态； 4. 试剂盒中各组分成分应在-20℃保存； 5. 在使用Random Primer时，要注意随机引物量和总RNA量之间的关系，一般建议50 ng随机引物/5 ug总RNA。当提高Random/RNA的比率将会提高短片段（～500 bp）cDNA的合成；而当降低Random/RNA的比率将会提高长片段cDNA的合成； 6. 如果模板RNA富含二级结构，可以先在65℃条件下处理5min； 7. 如果反转录中使用PCR下游引物，为了防止引物错配导致的非特异扩增，可以在50℃条件下进行反转录； 8. 在进行长片段扩增时，为了防止cDNA结果被破坏，建议以70℃下处理15 min为酶灭活条件； 9. 当使用酶类时，应轻轻混匀，避免起泡；分取之前要小心地离心收集到反应管底部，由于酶粘度高，吸取时应慢慢吸取。 注意：如果要扩增长片段，需使用新鲜提取所得的完整性好、纯度高的RNA。 储存条件： 本产品中的各成分可在-20℃条件下保存1年。
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文献和实验using the AllPrep DNA/RNA 96 Kit. Real-time RT-PCR analysis of the PGK1 transcript was performed using a primer-probe set that could amplify and detect both mRNA and genomic DNA sequences. The flat amplification plot for the no RT control (-RT) indicates
The RT-PCR kit contains polymerase and all necessary reagents to perform single tube RT and PCR. However, we will break the reaction into two discrete steps, RT (reverse transcription to convert mRNA to cDNA) and PCR
合酶活性相互竞争RNA模板与DNA引物或cDNA延伸链间形成的杂合链，并降解RNA：DNA复合物中的RNA链。被RNaseH活性所降解的RNA模板不能再作为合成cDNA的有效底物，降低了cDNA合成的产量和长度。因此消除或大大降低逆转录酶的RNaseH活性将会大有裨益。SuperScriptⅡ逆转录酶，RNaseH- 的MMLV逆转录酶及ThermoScript逆转录酶，RNaseH- 的 AMV，比MMLV和AMV得到更多量和更多全长的cDNA（图3）。RT-PCR灵敏度会受cDNA合成量的影响
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