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- 文献和实验
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冷藏
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长期
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大量
- 供应商:
康朗生物
- 规格:
2000U
M-MLV(RNase H-) 反转录酶
编号:KL104规格:2000U
● 产品简介:
M-MLV反转录酶(RNase H-),是一种经过改造和优化的反转录酶。和普通的M-MLV反转录酶相比,缺失了Ribonuclease H (RNase H)酶活性,不能够选择性剪切RNA和DNA杂合双链中的RNA,可以合成长片段从DNA。
本产品中M-MLV反转录酶(RNase H-)的浓度为200U/μl,用于体积为20微升的反转录体系时足够进行10次反转录反应。
特点:M-MLV反转录酶(RNase H-)可以合成长达9-13kb的cDNA。该反转录酶的最适反应温度为42-45℃并且在55℃时仍然有很高活性,可以避免普通的M-MLV反转录酶(RNase H-)在37℃反应时的一些不足。
用途:M-MLV反转录酶(RNase H-)常用于在获得总RNA或mRNA后cDNA第一条链的合成。合成的cDNA第一条链后续可以用于PCR、real-time PCR、cDNA第二条链的合成等。
来源:该反转录酶(RNase H-)由大肠杆菌表达
活性定义:One unit of the enzyme incorporates 1 nmol of dTMP into a polynucleotide fraction in 10 min at37℃. Enzyme activity is assayed in50 mMTris-HCl (pH 8.3),6 mMMgCl2,10 mMDTT,40 mMKCl,0.5 mMdTTP, 0.4 MBq/ml [3H]-dTTP0.4 mMpolyA?oligo(dT)12-18.
纯度:不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶和RNA酶,可以满足常规反转录合成cDNA第一条链等的需要。
酶储存溶液:50 mMTris, pH 8.3,100mMNaCl,1 mMEDTA,5 mMDTT, 0.1% Triton X-100 and 50% glycerol。
5×RT buffer:250 mMTris, pH 8.3 at25℃,250 mMKCl,20 mMMgCl2,50 mMDTT。
失活或抑制:70℃孵育10分钟可以导致M-MLV反转录酶(RNase H-)失活;EDTA、EGTA等螯合剂、无机磷酸盐或焦磷酸盐以及聚氨(polyamine)对该反转录酶(RNase H-)有抑制作用。
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文献和实验50µl M-MLV Reverse Transcriptase (b) (200U/µl) 4000U 10000U RNase-free ddH2 O 1ml
酶的反转录酶有关,在病毒基因组 进入DNA转录的不同阶段执行重要的功能。在真细菌中,核糖核酸酶H确信在以下方面是所必需的:从Okazaki片段去除RNA引物时、在转录子进入DNA聚合酶I启动DNA合成所用引物的转录过程时,以及在去除R-环为在大肠杆菌染色体复制起点提供不规则DNA合成的条件性启始位点。在真核细胞中核糖核酸酶H也可能执行类似的功能。 已有报告讲核糖核酸酶 H可明显增加反义寡脱氧核糖核酸对基因表达的抑制。这些寡核苷酸和mRNA中的特定序列的杂合子对此酶的降解敏感。核糖
依赖于RNA合成DNA的酶。也称为RNA依赖性DNA聚合酶。是含于病毒——致癌RNA病毒(Retrovirus)粒子中的一种酶,以单链RNA为模板,合成具有与此相辅的核苷酸序列的DNA。是1970年由H.M.Temin等和D.Baltimore各自独立发现的。通过此酶首先从病毒RNA合成RNA-DNA杂化物,再从这杂化物合成双链DNA。仅分解 RNA- DNA杂化物RNA部分的核糖核酸酶H活性存在于此酶上。开始认为此酶仅存在于RNA病毒中,但后来由未感染病毒的细胞和正常组织中也分离出同样
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