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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
4℃
- 保质期:
一年
- 英文名:
Annexin V-EGFP/PI Apoptosis Detection Kit
- 库存:
647
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 规格:
20 rxn
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-EGFP/PI) 细胞凋亡与增殖由专业试剂供应商北京百奥莱博提供,用于科研实验,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-EGFP/PI)等细胞凋亡与增殖产品请联系我司咨询订购。
名称:细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-EGFP/PI) 细胞凋亡与增殖
品牌:百奥莱博
编号:SY0472
产地:国产|进口
规格:20 rxn
英文名:Annexin V-EGFP/PI Apoptosis Detection Kit
Annexin V-EGFP/PI细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-EGFP/PI Apoptosis Detection Kit)是用EGFP标记了的Annexin V作为探针,来检测细胞早期凋亡的发生,可用荧光显微镜、流式细胞仪或其他荧光检测设备进行检测。
其检测原理为:在正常的活细胞中,磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine,PS)位于细胞膜的内侧,但在早期凋亡的细胞中,PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中。Annexin-Ⅴ(膜联蛋白-V)是一种分子量为35-36KD的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。
另外,本试剂盒中还提供了碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞。PI是一种核酸染料,它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜,但可以透过凋亡晚期和坏死细胞的细胞膜而使细胞核染红。因此,将Annexin V与PI联合使用时,PI 则被排除在活细胞(Annexin V-/PI-)和早期凋亡细胞(Annexin V+/PI-)之外,而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被EGFP 和PI 结合染色呈现双阳性(Annexin V+/PI+)。
产品组份:
Annexin V-EGFP———————100 μl
PI Staining Solution————100 μl
1×Binding Buffer——————8 ml
注意事项
1) 由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后1小时之内进行分析。
2) 对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。胰酶消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤,PI摄入过多;消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与Annexin V-EGFP的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后,轻摇时胰酶与细胞充分接触,然后倒掉大部分胰酶,利用剩余的少量胰酶再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA,EDTA会影响Annexin V与PS的结合。
3) 实验中如需要固定细胞,比如在检测凋亡的同时检测细胞周期,只能选用Annexin V-FITC,而不能选用Annexin V-EGFP,因为在固定过程中EGFP会变性导致丧失激发荧光的能力。固定前需要先将细胞与Annexin V-FITC进行孵育,并用binding buffer洗掉未结合的Annexin V-FITC。因为固定过程中细胞通透性增加会产生细胞碎片,可以和Annexin V结合,对结果产生干扰。
4) 如果样品来源于血液,请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。
5) 试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
6) Annexin V-EGFP和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。
储存条件:4℃,有效期一年。
更多有关细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-EGFP/PI) 细胞凋亡与增殖的价格及使用说明等,请联系我们的业务经理王欣女士咨询,我公司还销售以下产品:
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细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-EGFP/PI) 细胞凋亡与增殖关键词:SY0472,Annexin V-EGFP/PI,Annexin V-EGFP/PI Apoptosis Detection Kit,细胞凋亡检测试剂盒(Annexin,细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-EGFP/PI)
·人源氧化低密度脂蛋白
编号:SY0439
英文名称:Human Ox-LDL
规格:1mg
我司提供的人源氧化低密度脂蛋白(Human Oxidized Low Density Lipoprotein,Ox-LDL),是由过度铜离子介导人血浆来源的LDL进行的氧化修饰。新鲜血浆经检测为HCV,HBsAg和HIV阴性。本产品为无菌包装,可以直接稀释使用。本Ox-LDL广泛用于脂质代谢的研究。另外我们还提供High Ox-LDL可产生明显的氧化应激,能够用来诱导细胞凋亡,并建立细胞损伤模型。除提供Ox-LDL,我们还提供人源乙酰化LDL(Ac-LDL),以及荧光标记的LDL。
LDL是由极低密度脂蛋白(VLDL)转变而来,主要功能是把胆固醇运输到全身各处细胞,运输到肝脏合成胆酸,其可用于研究受体介导的内吞作用过程,尤其是在动脉粥样硬化等疾病中,其血浆来源的LDL可用于研究LDL在功能和代谢中的氧化作用。
氧化的LDL(Ox-LDL)是修饰LDL中的一类。修饰的LDL除包括氧化修饰的LDL外,还包括乙酰化LDL及丙二醛(MDA)、4-羟烯酸(4-HNE)直接结合的LDL,这些未经氧化修饰而仅经一般化学修饰的LDL称为衍化的LDL。不同于衍化的LDL,Ox-LDL 的生理学独特性表现在:1)在细胞生理功能影响上,Ox-LDL可诱发细胞毒性作用,影响花生四烯酸的代谢,抑制胆固醇酯化作用等,但衍化的LDL无上述效应;2)Ox-LDL消耗LDL内源性抗氧化物质,使LDL上的维生素E含量下降,而MDA-LDL无上述效应;3)氧化修饰涉及脂质过氧化反应,LDL中的PUFAs被氧化。MDA对LDL修饰,是直接和ApoB-100结合成希夫氏碱,脂质过氧化反应轻微;4)氧化LDL在氧化程度低时,ApoB降解;在氧化程度高时,ApoB又可发生再聚合。MDA对LDL的修饰,ApoB无降解、聚合反应发生;5)Ox-LDL 产生的荧光峰波长为430nm,而MDA -LDL的荧光峰波长为460nm。Ox-LDL不经LDL受体代谢,由清道夫受体识别、结合、内吞饮入细胞并丧失正常的胆固醇代谢途径,引起细胞内脂质沉积,泡沫样变。
LDL氧化修饰的方式有很多种,常见的有:1)细胞介导的LDL氧化修饰,又称为生物氧化修饰的LDL。如内皮细胞,巨噬细胞,单核细胞都具有此功能;2)过度金属离子介导的LDL氧化修饰,如Ca2+,Fe2+等;还有其他形式的氧化修饰,包括物理方法如紫外线,或过氧化物酶催化。
蛋白纯度:>97%(琼脂糖凝胶电泳)
蛋白浓度:1.0~3.9 mg/ml(Lowry法)
外观:无色乳状液体
缓冲液配方(Buffer Formulation):<0.1 μM EDTA-Na2 in PBS, pH 7.4
氧化程度(Oxidized Ratio):TBARS检测(根据MDA的含量反映LDL的氧化程度)
起始LDL:0.1~0.5 nmol MDA/mg蛋白
Ox-LDL:20~26 nmol MDA/mg蛋白
储存条件:4℃,建议避光,有效期6周
细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-EGFP/PI) 细胞凋亡与增殖关键词:SY0472,Annexin V-EGFP/PI,Annexin V-EGFP/PI Apoptosis Detection Kit,细胞凋亡检测试剂盒(Annexin,细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-EGFP/PI)
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文献和实验Annexin V是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸PS有高度亲和力,可通过细胞外侧暴露的PS与凋亡早期细胞胞膜结合,将Annexin V标记上荧光染料利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。 由于凋亡晚期或坏死细胞膜完整性丧失,细胞核染色液可进入细胞内染色细胞核,搭配Annexin V使用可将处于不同凋亡时期的细胞区分开。 A.悬浮细胞: 按照实验方案进行凋亡诱导,300 g离心5 min,弃上清,收集细胞,用PBS洗涤细胞一次,轻轻重悬浮细胞并计数。 取1~5 ×
膜,但凋亡中晚期的细胞和死细胞由于细胞膜通透性的增加,PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V与PI匹配使用,就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。 因此,将Annexin V与PI联合使用时,PI 则被排除在活细胞(Annexin V-/PI-)和早期凋亡细胞(Annexin V+/PI-)之外,而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被FITC 和PI 结合染色呈现双阳性(Annexin V+/PI+)。 图Annexin V 检测细胞凋亡原理二、试剂盒组份
示例: Jurkat细胞用1μM喜树碱(Camptothecin) (左)或未加药 (右)处理4h,FITC-Annexin V/PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒染色后,流式细胞仪荧光检测。 Annexin V-FITC单阳性细胞为早期凋亡细胞,Annexin V-FITC和PI染色双阳性的细胞为坏死细胞或者晚期凋亡。PI单染色阳性位裸核细胞。 实测数据可能会因细胞类型、细胞凋亡情况,检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。 流式检测细胞凋亡的数据分析方法: 1) 选中所有颗粒,将FSC
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