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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃,避免反复冻
- 保质期:
长期
- 英文名:
Lysis Buffer for WB/IP Assays (without enzyme inhibitors)
- 库存:
990
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 规格:
100ml
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产供应北京现货免疫印迹及免疫沉淀用裂解液(不含蛋白酶磷酸酶抑制剂)特价促销,我公司销售全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
名称:北京现货免疫印迹及免疫沉淀用裂解液(不含蛋白酶磷酸酶抑制剂)特价促销
品牌:百奥莱博
规格:100ml
产地:国产|进口
英文名:Lysis Buffer for WB/IP Assays (without enzyme inhibitors)
本品WB/IP裂解液,是一种非变性条件下的裂解液,可以有效维持原有的蛋白间的相互作用。其主要裂解成分为1%的Triton X-100,不含蛋白酶、磷酸酶等抑制剂,裂解得到的蛋白样品可用于Western、IP、CoIP以及许多兼容1%Triton X-100的酶活性或者生物小分子的检测。
注意事项
1)本品不含蛋白酶/磷酸酶抑制剂,使用前请根据实验情况添加合适酶抑制剂或不加酶抑制剂。
2)裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
3)如果WB/IP裂解液得到的蛋白样品是用于酶活性测试或一些生物小分子的检测,需要测试标准品用该裂解液稀释后是否会显著影响标准曲线,如无显著影响,则可继续使用。
4) 用WB/IP裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白浓度(SY0298)。由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
5)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
(一) 细胞样品
1)融解WB/IP裂解液(无抑制剂),混匀。取适当量的裂解液,根据实验目的决定是否添加适当酶抑制剂。
2)贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液清洗细胞一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入100-200μl 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。
悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入100-200μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,需分装成5×105~1×106个细胞/管,然后再裂解。因为大团细胞较难裂解充分,而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。
3)充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀、免疫共沉淀、酶或生物小分子检测等操作。
裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞加入100μl裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150μl或200μl。
(二)组织样品:
1)把组织剪切成细小的碎片。
2)融解WB/IP裂解液(无抑制剂),混匀。取适当量的裂解液,根据实验目的决定是否添加适当酶抑制剂。
3)按照每20mg组织加入100-200μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)
4)用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
5)充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
6)如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得充分。
储存条件:-20℃,避免反复冻融,有效期12个月。
北京现货免疫印迹及免疫沉淀用裂解液(不含蛋白酶磷酸酶抑制剂)特价促销正在火爆热销,除此之外,为您推荐下别热销产品:
·活性氧(ROS)检测试剂盒
编号:SY0802
英文名称:Reactive Oxygen Species Assay Kit
规格:100~500T
本试剂盒采用了银染的方法,用于对聚丙烯酰胺凝胶和琼脂糖凝胶中的微量蛋白质进行检测。生化实验中蛋白质通过凝胶电泳的方式分离后需经过染色才能肉眼可见,染色方法有两种:1)染料染色法;2)金属染色法。前者主要是考马斯亮蓝染色法,后者主要采用银染法。前者操比较简单,省时;但是后者具有较高的检测灵敏性,可检测到10-100 ng蛋白质,比考马斯亮蓝染色法灵敏100多倍。
产品组份:
显影底物液(10×)————1×100ml
敏化底物液(5×)————3×90ml
银溶液(10×)—————1×20ml
溶液I(5×)——————1×16ml
溶液II—————————1×10ml
溶液III————————1×2ml
终止液(10×)—————2×100ml
使用方法
以10cm2凝胶为例,不同凝胶大小可按比例调整增敏液、显色液和终止液的体积。
所有浓缩液使用前用去离子水稀释至1×工作液,水平摇床的转速设置在55rpm左右。
1)固定:按体积比,冰醋酸:无水乙醇:去离子水=1:4:5配制100ml固定液,将电泳后的凝胶放入固定液中,室温条件置于水平摇床上,缓慢震荡固定120min;
2)增敏:用去离子水分别稀释5×敏化底物液,以及5×溶液I至1×工作液。取65.5ml 1×敏化底物液加入4ml 1×溶液I、500μl 溶液II、30ml 无水乙醇混匀即得到增敏液。然后将凝胶放入100ml增敏液中,室温条件置于摇床上摇动60min;
3)洗涤:用去离子水漂洗30min,期间更换3~5次。
4)银染:用去离子水稀释10×银溶液至1×工作液。取10ml 1×银溶液加入40μl 溶液III,加入去离子水补足体积至100ml即得到银染液。然后将凝胶放入100ml银染液中,室温条件置于摇床上摇动60min;
5)洗涤:用去离子水漂洗银染后的凝胶4次,每次1min;
6)显色:用去离子水稀释10×显影底物液至1×工作液。取40ml 1×显影底物液加入40μl 溶液III、3μl 1×溶液I,加入去离子水补足体积至100ml即得到显色液。然后将凝胶放入100ml显色液中,室温条件置于摇床上摇动6min。【注意】:显色 的时间可控制在1-15min,直至出现比较理想的预期蛋白条带。
7)终止:用去离子水稀释10×终止液至1×终止液。取100ml 1×终止液,将显色后的凝胶放入其中,室温条件置于摇床上摇动,反应40min;
8)洗涤:用100ml去离子水洗30min,期间更换2次。
9)照相:保存显色出的蛋白质条带并记录。
注意事项
1)显色过程较快,要注意把握时间,避免染色过度。
2)所用器皿要很洁净,不要用手直接接触,以免杂蛋白污染。
3)清洗用水尽量用高纯度去离子水如ddH2O,可以减少背景着色。
4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
储存条件:4℃,有效期一年。
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·牛饱和铁转铁蛋白
编号:SY0458
英文名称:Bovine Transferrin, HOLO
规格:100mg
饱和铁转铁蛋白(holo transferrin)持续地释放铁离子,并形成脱铁转铁蛋白(apo transferrin)。研究表明,饱和铁形态的转铁蛋白对于促进细胞生长是最有效的形态。对于杂交瘤,黏连细胞和悬浮细胞系,在细胞培养过程中,应保持培养基中转铁蛋白浓度在0.5-100μg/ml。针对不同的细胞系,需要选择最合适的浓度。
Bovine Transferrin(牛转铁蛋白)是一种广泛使用的生物可利用铁来源,细胞和组织培养中重要的促生长营养物。采用新西兰来源的牛血浆,利用亲和色谱层析技术制备而得,保证了产品的高纯度、蛋白完整性、无辛酸残留及提取过程无热或溶剂引起的变性效应,符合ISO质量体系,确保了高质素的产品安全标准。
Bovine Transferrin(牛转铁蛋白)以高纯度、热处理、冻干粉状态提供,并有脱铁(apo)或饱和铁(holo)两种形式。
转铁蛋白冻干粉需要保存在冷藏状态下,使用之前再溶解。一般用PBS或者纯水在室温下将转铁蛋白冻干粉溶解成储液,浓度为2 mg/ml,然后用无菌滤膜进行过滤,滤液可在无菌条件下4℃保存5-10天。
英文别名:Serum transferrin; beta-1-Metal-combining protein; Siderophilin
来源:牛血浆
含铁量:不少于1000 ppm
分子量:约76,000-81,000
外观:浅红色冻干粉
纯度:≥95%(w/w总蛋白)
溶解性:溶于水(10 mg/ml),在20-25℃完全溶解约20min
储存条件:4℃
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F040322 绵羊IgG抗原 Sheep IgG
Na-对甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯盐酸盐 Carbonic anhydrase 1784-03-8
BL1041 苦味*(代"酸")
ARB11092 人垂草扁桃酸(VMA)ELISA代测服务 Human vanillylmandelic acid,vma ELISA KIT
ARB11309 人促卵泡素(FSH)血清中含量检测 Human follicle-stimulating hormone,fsh ELISA KIT
PY01-008 牛肉粉 250克
ARB13393 仔猪副伤寒(SP)elisa测定使用说明书
ARB12485 大鼠总甲状腺激素(TT4)Elisa定量检测 Rat tt4 ELISA KIT
ARB13320 山羊促卵泡生成素(FSH)免费代测
D-果糖 Iohexol 57-48-7
E0610 抗凝裂解山羊血(无菌)
三苯基氧化膦 Polyacrylic resin Ⅳ 791-28-6
ARB12199 大鼠半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(CysC)含量测试 Rat cystatin c ELISA KIT
亮绿 MES sodium salt 633-03-4
25322-68-3 聚乙二醇8000 PEG8000
PY02-120-2 MC琼脂培养基 250克
ARB12665 大鼠碱性成纤维细胞生长因子6(bFGF-6)Elisa定量检测 Rat basic fibroblast growth factor 6,bfgf-6 ELISA KIT
ARB10680 人血管舒缓激肽(BK)代做ELISA实验 Human bradykinin,bk ELISA KIT
BL1187 内毒素清除剂
2-硫脲嘧啶 Basta 141-90-2
北京百莱博科技有限公司是蛋白质研究产品的专业生产供应销售商,恭候您的咨询选购北京现货免疫印迹及免疫沉淀用裂解液(不含蛋白酶磷酸酶抑制剂)特价促销。
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文献和实验测定方法比较 注意事项: a. 应尽量避免引入影响后续定量的杂蛋白(如细胞培养液、蛋白酶抑制剂等)及其他干扰物质; b. 样品浓度应适中,1×SDS凝胶加样缓冲液建议用量:贴壁细胞按10 cm2培养皿/0.1 ml,悬浮细胞按5×106细胞/0.1 ml比例加入; c. SDS对蛋白质变性和电泳分离至关重要,浓度应控制在2-10% 之间,并根据具体需要调整; d. 制备好的样品可以在-20℃ 保存,但时间不宜过长,并避免反复冻融,否则蛋白会发生降解; e. 内参
糖基化、糖基化和磷酸化糖基化。3、Ubiquitination:泛素是一类分子量为 8 kDa 的多肽,由 76 个氨基酸组成,通过泛素 C 末端的甘氨酸连接到靶蛋白赖氨酸的 ε-NH2 上。在最初的单泛素化事件之后,可能形成泛素聚合物,然后 26S 蛋白酶体识别多聚泛素化蛋白,26S 蛋白酶体催化泛素化蛋白的降解和泛素的再循环。以下实验提供了检测泛素化蛋白的方法示例。 图示:HeLa 细胞裂解液中泛素的检测。进行 Weste blot 分析,比较 4 种检测 HeLa 细胞裂解液中泛素蛋白的方法
冰浴中操作。 (1)处理10C1TI培养皿上1X10‘细胞,确保目的基因处于转录激活状态,同样处理另一个10cm培养皿用于细胞计数。 (2)将组蛋白与DNA相互交联,加入终浓度为1%甲醛到培养基上,37℃孵育10min。 (3)尽可能的吸去培养液,用含有蛋白酶抑制剂的冷PBS洗两次。 (4)将细胞刮人锥形管中。 (5)4℃,2 000r/min离心4min。将SDS裂解液放置室温,使SDS溶解,并加入蛋白酶抑制剂
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