通用型动物组织PCR试剂盒说明书

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括通用型动物组织PCR试剂盒说明书在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：通用型动物组织PCR试剂盒说明书
产地：国产|进口
编号：SY0049
规格：50T|200T
品牌：百奥莱博
英文名：Animal Tissue Direct PCR Kit
该试剂盒可用于转基因型鉴定、动物基因分型等多种大规模基因检测。动物组织直接PCR试剂盒是一种可直接对不同动物组织进行PCR扩增的试剂盒，适应性广、稳定性强。试剂盒中采用独特的裂解缓冲液体系，可以简便快速的裂解多种动物组织样品并释放出基因组DNA。整个过程不需要除去蛋白、RNA及其它次生代谢物，也无需有机溶剂抽提，即可得到质量稳定的基因组DNA，无需后续纯化步骤即可直接用于PCR反应。而且样品需求量小，少到5mg动物组织即可进行实验。

试剂盒中提供的 2×Tissue Master Mix 具有很强的扩增兼容性，能直接以待测样品裂解液为模板，进行高效特异性扩增。该试剂为2倍浓缩PCR反应混合物，包含了用于PCR扩增除模板和引物外的所有组分，并以dUTP替代了dTTP，另外加入了能够降解含有dUTP 模板的 UNG 酶(Uracil-N-glycosylase)。在PCR反应前，利用UNG酶降解含有尿嘧啶的PCR产物，UNG 酶对不含有尿嘧啶的模板不会造成任何影响，从而保证扩增的特异性和准确性，防止了大规模基因检测时可能出现的PCR产物污染问题。优化的2×Tissue Master Mix与直接裂解液配合使用能够快速简便地对样品进行检测，并具有灵敏度高、兼容性强、特异性强、稳定性好等特点。

产品组分：

组分	50T	200T	储存
2×Tissue MasterMix*	500 μl	1 ml×2	-20℃
Buffer AL	5 ml	20 ml	室温或4℃
Protease	220 μl	880 μl	4℃
6×DNA Loading Buffer	1.5ml	1.5ml	4℃

注：2×Tissue Master Mix中包含Tissue Taq DNA 聚合酶、UNG酶、dNTP（dUTP替代了dTTP）、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应增强剂、优化剂和稳定剂。

保存方法
① 本试剂盒的2×Tissue Master Mix保存在-20℃，避免反复冻融。
② Buffer AL在常温干燥条件下，可保存12个月，如需保存更长时间可置于4℃。
③ Protease溶液具有独特配方，常温保存（25℃）可长期具有活性，在4℃保存，其活性和稳定性会更好，因此建议将其置于在4℃保存，请勿置于-20℃保存。

注意事项
1）本试剂盒适用于常规PCR，请勿用于多重PCR鉴定；建议扩增片段在1kb以内。
2）注意实验用具的清洁以及实验的操作手法，避免样本间的交叉污染。
3）建议采用新鲜采取的动物组织，若为长期冷冻组织，应尽量避免反复冻融，否则会导致模板的降解，影响PCR效率。
4）Buffer AL若低温保存，容易产生沉淀。在使用前务必将其在室温中放置一段时间，也可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀，混匀后再使用。
5）电泳检测时，切勿使用含有 SDS 的 Loading Buffer，否则在电泳时会在泳道中出现一大团拖尾亮带，影响实验结果。
6）建议设立阳性及阴性对照反应。阳性对照可用50ng纯化的动物DNA为模板，阴性反应以ddH2O为模板，引物可采用以前成功扩增的引物。
7）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作方法

1. 取5-10mg动物材料，置于离心管中。尽量剪碎动物材料，以使之后的酶解反应容易进行。
2. 取100μl Buffer AL并加入4μl Protease，涡旋混匀。
3. 向混合液中加入动物组织，涡旋混匀。
4. 65℃孵育10-30min，然后95℃处理5min。
【注】：65℃孵育，一般只需10min即可满足多数PCR需求。若需要的DNA量较大或样品较难酶解，可以将时间延长至30min。组织块不需完全酶解，残余的部分在后续离心步骤中可被除去。
5. 12,000 rpm (~13,400×g )离心5min。
6. 转移上清至新的离心管，4℃或-20℃放置备用或直接用于PCR扩增。
【注】：用于后续PCR检测时，模板量占PCR体系的1-10%之间最佳，不能超过20%。如50μl 的PCR体系中，加入0.5-5μl 裂解液即可，但不能超过10μl。
7. PCR反应体系配制*
按照下表配制PCR反应体系，配置好反应体系后，短暂涡旋充分混匀并瞬时离心，将所有试剂收集到管底。

ddH2O	Up to 20μl
2×Tissue Master Mix	10μl
正向引物（10μM）	0.5μl
反向引物（10μM）	0.5μl
模板 DNA	xμl

【*】：① 配制的PCR反应体系可根据所需终体系（如50μl）按照该比例进行调整。
② 通常引物终浓度为0.2-0.25μM可以得到较好结果。反应性能较差时，可以在0.1-0.5μM范围内调整引物浓度。
8. PCR反应条件设置
此表PCR反应条件仅供参考。PCR反应条件因模板、引物等的结构条件不同而各异。具体操作中需要根据模板类型、目的片段大小、扩增片段的碱基序列和引物的GC含量及长短等具体情况来优化最佳的反应条件，包括退火温度，延伸时间等。

循环步骤	温度	时间	循环数
UNG酶处理	50℃	5min	1
灭活UNG酶&预变性	94℃	5min	1
变性	94℃	10sec	30-40循环
退火a	50-65℃	20sec
延伸b	72℃	30 sec/kb
彻底延伸	72℃	5min	1

【注】：a. PCR程序中的退火温度需根据引物的Tm值自行设置；
b. 延伸时间需要根据片段的长度来确定，对于1kb以内的DNA*(代"片")段，建议延长时间为30秒。

通用型动物组织PCR试剂盒说明书极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

·Hoechst 33342
编号：SY0552
规格：10mg
Hoechst 33342是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，它在嵌入双链 DNA 后释放强烈的蓝色荧光，对细胞的毒性较低。Hoechst 33342 常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。也可以用于普通的细胞核染色，或常规的DNA染色。

本品为粉末状，用于细胞核染色时，推荐的Hoechst 33342工作浓度为0.5-10μg/ml

中文名称：二苯甲亚胺, 三氯化氢 2-(4-乙基苯基)-5-(4-甲基-1-哌嗪基)-2,5-二-1H-苯并咪唑
英文名称：2’-(4-Ethoxyphenyl)-5-(4-methyl-1-piperazinyl)-2,5’-bi-1H-benzimidazole, trihydrochloride
分子式：C27H28N6O·3HCl
分子量：561.93
CAS：23491-52-3
储存条件：-20℃干燥避光，有效期一年。
结构式



通用型动物组织PCR试剂盒说明书关键词：通用型动物组织PCR试剂盒,SY0049,Animal Tissue Direct PCR Kit

L-半胱氨酸乙酯盐酸盐 Resveratrol 868-59-7
吡啶甲酸铬 Benzocaine 14639-25-9
3-吲哚乙酸 Rink-Amide resin 87-51-4
BL1309 2×Taq PCR MasterMix(含染料)
ARB11804 人雌激素诱导蛋白PS2 含量检测 Human estrogen-induced protein ps2 ELISA KIT
ARB11438 人真核翻译起始因子3A(eIF3A)检测服务 Human eukaryotic translation initiation factor 3a,eif3a ELISA KIT
ARB11498 人脂质运载蛋白2(LCN2)含量分析 Human lipocalin 2,lcn2 ELISA KIT
ARB10549 human皮肤T细胞虏获趋化因子(CTACK/CCL27)ELISA代测服务 Human cutaneous t cell-attracting chemokine,ctack ELISA KIT
ARB13305 小鼠磷酸肌醇3激酶(PI3K)血清中含量检测 Mouse phosphotylinosital 3 kinase,pi3k ELISA KIT
ARB12824 小鼠干细胞因子/肥大细胞生长因子(SCF/MGF)酶联免疫定量检测 Mouse stem cell factor/mast cell growth factor,scf/mgf ELISA KIT
D-葡萄糖-6-磷酸三钠盐 Gum tragacanth powder 53411-70-4
ARB11370 人前列腺素E1(PGE1)Elisa分析 Human prostaglandin e1,pg-e1 ELISA KIT
SJ0572 TMB-2HCL 四甲基联苯胺二盐酸
BTN130663 T4噬菌体基因32蛋白 T4 Gene 32 Protein
BTN130413 肝素琼脂糖 Heparin Agarose
硫酸巴龙霉素 ADPG 1263-89-4
ARB10276 人大内皮素(BIg ET)检测服务 Human big endothelin,big et ELISA KIT
BL0872 羊抗猪IgG免疫血清 0.5ml
罗丹明B Potassium tetraphenylborate 81-88-9
ARB10401 人可溶性肿瘤坏死因子α受体(sTNFαR)酶标法分析 Human soluble tumor necrosis factorαreceptor,stnfαr ELISA KIT
通用型动物组织PCR试剂盒说明书关键词：通用型动物组织PCR试剂盒,SY0049,Animal Tissue Direct PCR Kit


·罗丹明123
编号：SY0493
英文名称：Rhodamine 123
规格：5mg
Rhodamine 123 (罗丹明123, Rh 123)是一种常用的阳离子绿色荧光染料，可以透过细胞膜从而在活细胞线粒体内聚集，并发出黄绿色荧光。广泛用作检测线粒体膜电位的荧光探针，并且对细胞没有任何毒性。

CAS：62669-70-9
分子式：C21H17ClN2O3
分子量：380.82
纯度：≥98%（HPLC）
储存条件：-20℃避光,有效期一年

使用方法
1. 用载玻片准备细胞。细胞数目应为 5×104～5×105个/mL。
2. 孵育该载玻片，用 PBS或Hank’s 液洗涤细胞。
3. 用培养基稀释 Rh123母液以制备 1～20µM Rh123缓冲液。具体工作浓度取决于细胞类型和细胞浓度。
4. 将 Rh123缓冲液加入载玻片并在37℃下孵育 30 分钟至 1 小时。
5. 去除 Rh123 缓冲液并用培养基洗涤细胞（洗涤细胞后为了固定，加入 10%福尔马林缓冲液并孵育 15～20 分钟，接着用 PBS洗涤）。
6. 用带有荧光素滤光片的荧光显微镜观察细胞。

·EGR1-GFP报告基因质粒
编号：SY0181
英文名称：EGR1 GFP Reporter Plasmid
规格：1μg
EGR1-GFP报告基因是用于检测EGR1转录活性水平为目的的报告基因。早期生长反应基因1(early growth response gene 1 , EGR1) 为早期生长反应基因家族重要成员，其蛋白产物是一个59KD的锌指样转录因子。EGR1的目的基因是分化和有丝分裂所必须的。

EGR1-GFP报告基因主要检测细胞中ERG1相关信号通路、药物研究、基因过表达和RNAi的表型分析等。

pGMEGR1-GFP是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个EGR1结合位点，可以高效地检测EGR1的激活水平。由于载体采用了GFP作为报告基因，更便于后续的检测。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，增加了质粒的转录因子结合特异性。另外，由于质粒体积减小，使得EGR1-GFP报告基因更易于转染。

质粒图谱



pGM EGR1 -GFP质粒测序引物
5’-TAGCAAAATAGGCTGTCCC-3’

使用说明
pGMEGR1-GFP可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。

注意事项
1）本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
2）为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

储存条件：-20℃。

我公司生产供应销售的核酸扩增(PCR)正全品类优惠促销，十分期待您的咨询选购通用型动物组织PCR试剂盒说明书。