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文献和实验使之与宿主菌比约1/500-1000)。 ⑵ 加麦芽糖(0.2%),MgSO4(10mM),37℃温育20min,使噬菌体颗粒吸附于细菌。 ⑶ 加到100ml LB液体培养基中,加麦芽糖(0.2%),MgSO4(10mM),37℃摇震培养9-12hr后可见裂解发生。 ⑷ 加0.1ml氯仿,37℃继续摇震培养10-20min。 (二)λ噬菌体DNA提取 1.将上述裂解液转移至离心管,离心8000g×10min,去细菌碎片,取上清液。 2.加RNase A、DNaseI 至1μg/ml, 37℃
一、 实验原理:2-DE的第一向电泳等电聚焦是基于等电点不同而将蛋白粗步分离,第二向SDS-PAGE是基于蛋白质分子量不同,而将一向分离后的蛋白进一步分离。这样就可以得到蛋白质等电点和分子量的信息。 二、 实验步骤: 1. 样品的溶解 取纯化后的晶体蛋白3.0mg,加入300ul裂解液(1mg蛋白:100ul裂解液)振荡器上振荡10min左右,共处理一个小时。其中每隔10~15分钟振荡一次,然后13200rpm离心15min除杂质,取上清
后,小心取出梳子。将稀释10倍的电极缓冲液倒入两槽中,前槽(短板侧)缓冲液要求没过样品槽,后槽(长板侧)缓冲液要求没过电极,备用。 4.样品的制备 称取小麦幼苗茎部0.5g,放入研钵内,加pH8.0提取液1ml,于冰水浴中研成匀浆,然后以2ml提取液分几次洗入离心管,在高速离心机上以8000r/min离心10min,倒出上清液,以等量40%蔗糖及1/5体积溴酚蓝指示剂混和,留作点样用。 5.点样 用微量注射器(50μl)吸取少量样液,在浓缩胶上层点样,每个点样槽15~50μl。点样时须小心
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