双萤光素酶报告基因检测试剂盒厂家价格

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北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销售，产品线涵盖双萤光素酶报告基因检测试剂盒厂家价格在内的细胞生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。

名称：双萤光素酶报告基因检测试剂盒厂家价格
产地：国产|进口
规格：100次|1000次
英文名：Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit
品牌：百奥莱博
编号：YT273
本试剂盒是先以萤光素为底物来检测萤火虫萤光素酶，后以肠腔素为底物来检测海肾萤光素酶，并且在后续加入海肾萤光素酶底物时，同时加入抑制萤火虫荧光素酶催化luciferin发光的物质，使后续检测仅仅检测到海肾萤光素酶的活性，实现双萤光素酶报告基因检测。

试剂盒组分：

报告基因细胞裂解液	60ml
萤火虫萤光素酶检测试剂	10ml
海肾萤光素酶检测缓冲液	10ml
海肾萤光素酶检测底物(100×)	100μl

萤火虫萤光素酶是一种分子量约为61kD的蛋白，在ATP、镁离子和氧气存在的条件下，可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的过程中，会发出生物萤光。海肾萤光素酶是一种分子量约为36kD的蛋白，在氧气存在的条件下，可以催化coelenterazine氧化成coelenteramide，在coelenterazine氧化的过程中也会发出生物萤光。生物萤光可以通过化学发光仪或液闪测定仪进行测定。本试剂盒的检测原理参考下图。


双萤光素酶的检测原理图。

通过萤光素酶和其底物这一生物发光体系，可以非常灵敏、高效地检测基因的表达。通常把感兴趣
基因的转录调控元件或5’启动子区克隆在luciferase的上游，或把3’-UTR区克隆在luciferase的下游等，构建成报告基因(reporter gene)质粒。然后转染细胞，用适当药物等处理细胞后裂解细胞，测定萤光素酶活性。通过萤光素酶活性的高低来判断药物处理等对目的基因的转录调控作用。Renilla luciferase相对更多地被用作转染效率的内参，以消除细胞数量和转染效率的差异。萤火虫萤光素酶催化luciferin发光的最强发光波长为560nm。海肾萤光素酶催化coelenterazine发光的最强发光波长为465nm。

注意事项：
1. 加入海肾萤光素酶检测工作液后对于上一步骤中的萤火虫萤光素酶的抑制可以达到99%以上。但总会残留微量活性，因此，宜在转染时把海肾萤光素酶的表达量控制在其RLU读数高于萤火虫萤光素酶RLU读数的10%。海肾萤光素酶的读数高于萤火虫萤光素酶的读数是完全可以的，通常不会有明显的负面影响。
2. 为取得最佳测定效果，在用单管的化学发光仪测定时，样品和测定试剂混合后到测定前的时间应尽量控制在相同的时间内，例如30秒内；使用具有化学发光测定功能的多功能荧光酶标仪时，宜先把样品全部加好，然后统一加入萤火虫萤光素酶检测试剂。
3. 由于温度对酶反应有影响，所以测定时样品和试剂均需达到室温后再进行测定。
4. 为保证萤光素酶检测试剂的稳定性，可以采取适当分装后避光保存的方法，以避免反复冻融和长时
间暴露于室温。经测试，反复冻融三次，对测定结果无明显影响。
5. 样品和测定试剂混合后，必须等待1-2秒，再进行测定。测定时间通常为10秒，根据情况也可以测定更长或更短时间，但是同一批样品宜使用相同的测定时间。
6. 海肾萤光素酶检测底物(100×) 配制在无水乙醇中。由于无水乙醇容易挥发，有时会在初次使用时发现体积明显小于100μl的情况，此时用无水乙醇把体积补足至100μl，并混匀后即可使用。
7. 海肾萤光素酶检测工作液宜配制后立即使用。如不能立即使用，-20℃可以保存一周。随着保存时间的延长检测效果会不断下降，因此不可配制成工作液后长期保存。

储存条件：-20℃，有效期一年。

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·一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(红色荧光)
编号：YT136
英文名称：One Step TUNEL Apoptosis Assay Kit
规格：20次|50次
本试剂盒提供了一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。对于经过固定和洗涤的细胞或组织，只要经过一步染色反应，洗涤后就可以通过荧光显微镜或流式细胞仪检测到呈现红色荧光的凋亡细胞。本试剂盒足够检测20个样品。

试剂盒组分：
TdT酶—————————40μl
荧光标记液——————960μl
TdT酶稀释液(选用)———00μl

细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200bp的DNA ladder。基因组DNA断裂时，暴露的3’-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl
Transferase,TdT)的催化下加上红色荧光探针Cy3(Cyanine 3)标记的dUTP，从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测，这就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测细胞凋亡的原理。

本试剂盒有如下优点：
(1)高灵敏度：背景染色极低，阳性染色明亮，可以在单细胞水平检测到细胞凋亡，同时由于凋亡早期就有DNA断裂，可以检测到早期的细胞凋亡。
(2)特异性：TUNEL检测时通常更容易标记凋亡细胞，而不容易标记坏死细胞。
(3)快速：仅需约1-2个小时即可完成。
(4)方便：只需一步染色反应，洗涤后即可观察，不必使用二抗等进行多步操作。
(5)应用范围广：可以用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况，也可以检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。

TUNEL法特异性检测细胞凋亡时产生的DNA断裂，但不会检测出射线等诱导的DNA断裂(和细胞凋亡时的断裂方式不同)。这样一方面可以把凋亡和坏死区分开，另一方面也不会把射线等诱导发生DNA断裂的非凋亡细胞判断为凋亡细胞。

极少数细胞凋亡时没有DNA断裂，此时不适用TUNEL法检测。在个别类型的坏死细胞中也发现TUNEL检测呈阳性。在需要严格判断细胞凋亡的情况下，最好同时检测多个凋亡指标。

注意事项：
1. 需自备用于洗涤细胞的PBS或HBSS，用于封片的抗荧光淬灭封片液(YT097)，用于固定的4%多聚甲醛或向百奥莱博订购免疫染色固定液(YT086)，同时需自备含0.1% Triton X-100的PBS或向百奥莱博订购免疫染色洗涤液(YT089)。
2. 如果用于石蜡切片的检测，需自备蛋白酶K，二甲苯。

储存条件：-20℃。


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·兔抗MGMT抗体
编号：YT740
英文名称：MGMT Rabbit Polyclonal Antibody
规格：50μl
本品为来源于兔的抗MGMT的多克隆抗体。
宿主：兔
克隆性：多克隆抗体
用途：WB,FC, IHC,ICC, IF
交叉反应性：人
分子量：22KDa
推荐稀释比例：WB(1:500-1:1000),IF(1:200),IHC(1:200),ICC(1:200),FC(1:100)

About this Antibody
Name	MGMT Rabbit Polyclonal Antibody
Category	Polyclonal antibody(pAb); Primary antibody
Isotype	IgG
Purification	Peptide affinity purified
About the Immunogen
Immunogen	This antibody is produced by immunizing rabbits with a synthetic peptide (KLH-coupled) corresponding to MGMT.
Gene ID	4255
SwissProt	P16455
Synonyms	Methylated-DNA-protein-cysteine methyltransferase; EC 2.1.1.63; 6-O-methylguanine-DNA methyltransferase; MGMT
Category	Cell Cycle / Checkpoint Control
Background	MGMT (O-6-methylguanine-DNA methyltransferase) is a DNA repair enzyme that participates in a suicide reaction that specifically removes methyl or alkyl groups from the O (6) position of guanine, restoring guanine to its normal form without causing DNA breaks. MGMT protects cells from alkylating toxins, and is an important factor in drug resistance to alkylating therapeutic agents. It is ubiquitously expressed in normal human tissues and is overexpressed in many types of human tumors, but epigenetically silenced in other tumors. MGMT silencing is a marker associated with poor prognosis, but is a good predictive marker for response to alkylating agent chemotherapy.

注意事项：
1. 如果本抗体用于Western blot (WB)、免疫荧光(IF)、免疫细胞化学(ICC)等实验，请注意回收使用过的稀释抗体。回收的抗体通常至少可以重复使用5-10次。稀释后的抗体，包括已经使用过的稀释抗体，请4℃保存。
2. 回收后重复使用的抗体，使用方法同新鲜稀释的抗体。如果在重复使用过程中发现抗体出现轻微混浊现象，可以10,000g离心1-3分钟，取上清用于后续检测。如果回收的抗体出现明显的絮状物或长霉长菌等情况，则可以考虑废弃该抗体。
3. 提供的Western一抗稀释液也可以用于免疫荧光(IF)、免疫组化(IHC)、免疫细胞化学(ICC)等适当用途。如果希望获得最佳的检测效果，请考虑使用上述检测专用的一抗稀释液。

储存条件：-20℃，有效期一年。


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