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人体的感知、运动等功能都和神经元的长距离信号传导密切相关。在科学研究中,如何高效标记和操作投射神经元一直是广大科研工作者所面对的难题。标记物在神经元中沿
其轴突从胞体行末梢进行示踪为顺行标记,从末梢行胞体进行示踪的为逆行标记,而拥有逆行标记能力的研究工具比较缺乏。
根据最新发表在 Neuron 杂志的文章 “ A Designer AAV Variant Permits Efficient RetrogradeAccess to Projection Neurons”[1]中策略(图1),汉恒生物研发团队对AAV病毒外壳进行改造,成功构建了AAV-Retro神经逆行标记腺相关病毒,该病毒能被突触轴突末端吸收,并在神经元中进行逆行传递和全细胞表达。

汉恒生物采用自包装神经逆行标记病毒AAV2/retro-EGFP病毒注射小鼠SNc(黑质致密部)部位,3周后取材切脑片检测其他脑区的荧光表达情况(图2)。发现在MGP(内侧苍白球)、LGP(外侧苍白球)、PFC(前额叶皮层)等部位可以检测到明显荧光表达,证明SNc神经元对MGP、LGP、PFC等区域均有大量投射。
参考文献:
[1] Tervo DG, Hwang BY, Viswanathan S, Gaj T,Lavzin M, Ritola KD, et al. A Designer AAV Variant Permits Efficient RetrogradeAccess to Projection Neurons. Neuron. 2016;92(2):372-82.
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文献和实验用于筛选的特殊基因,包括抗性基因、荧光蛋白基因等,标记基因的存在能够帮助人们确认病毒感染效率、筛选稳转细胞株等。上述特点都是常用病毒载体的共同特征,但根据科研目标的不同,我们常选择不同病毒载体进行研究。在对中枢神经系统的研究中,病毒载体因其独特的基因传递特征和靶向特异性,不仅被用来提高我们对基础神经生物学的理解,而且也被用来研究疾病或作为基因治疗载体。腺相关病毒(rAAV)载体和慢病毒(LV)载体是目前啮齿类动物和灵长类动物的中枢神经系统研究和基因治疗临床试验中最常用的载体。 图片来源:Curr
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先说结论:要在细胞里长期稳定表达、建稳转株、装大基因,优先慢病毒;要给动物打针、做在体长期表达、靶向不易分裂的细胞(神经元、心肌、肝细胞),优先 AAV。两者不是谁替代谁,是分工不同——选错载体,往往比选错基因更浪费时间。 本文面向在 AAV 和慢病毒之间纠结的科研人员。文中参数为公开文献与常见实验条件的参考范围,具体项目以官方为准。 --- 先给一个直接答案 两者不是谁替代谁,是分工不同——选错载体,往往比选错基因更浪费时间。 先把两个东西说清楚 AAV(腺相关病毒)是复制缺陷型小病毒
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