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- KALANG
- 中国大陆
- KL012
- 2025年07月15日
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- 保存条件：
冷藏
- 保质期：
长期
- 库存：
大量
- 供应商：
康朗生物
- 规格：
50T/200T
去内毒素质粒DNA提取试剂盒
规格：50T/200T编号：KL012
原理简介
本试剂盒在常规质粒提取试剂盒的基础上改进而来，增加内毒素清步骤，提取的质粒可用于一些要求更高的实验，如转染。
本试剂盒（以200T为例）可以用200小次或者10大次提取。
注意事项
1．溶液Ⅱ低温时可能出现析出和沉淀，可以37度水浴几分钟即可恢复澄清透明。用完请及时盖紧盖子。
2．溶液Ⅰ中加入RNase 后请放2-8度保存，如果长久不用（如一个月），可-20度冻存，或者按照比较分次加入。
3．可根据实验情况中量或者大量提取，加入的试剂等比放大。
4．内毒素清除剂在常温下出现面混浊现象，为正常，在2-8℃放置一段时间混浊会消失。
5．本试剂盒在去除内毒素的过程中会损失少量质粒，因而相对于常规提取，本试剂盒得率偏低。
操作步骤(以小量提取为例,中提或者大提可等比例加入)
在溶液Ⅰ中加入RNaseA，混匀，2－8度保存。
1．取过夜菌1-5毫升，5000g离心1分钟收集细菌沉淀，弃上清（可重复多次收集于一管中，收集量可考虑菌液浓度与质粒拷贝数），如为阳性细菌，可加入100mg/ml的溶菌酶悬浮菌液，37度处理30分钟，离心，收集沉淀。
2．在收集的菌液中，加入200ul溶液I，重悬细菌沉淀。确保沉淀完全散开，无可见细菌团块(可vortex 5-10秒或更长时间)。室温放置2-3分钟。
3．每管加入200ul溶液Ⅱ（如有沉淀，可37度水浴），轻轻颠倒离心管4-6次，使细菌完全裂解，溶液透明。放置2-3分钟，不过超过5分钟。但也不要混匀后立刻加入溶液Ⅲ。
4．放置2-3分钟后，每管加入200ul溶液III，随即颠倒离心管4-6次混匀，可见白色絮状物产生。
5．最高速(13,000rpm左右)室温离心5分钟。
6．将上清转移到新的离心管中，如有沉淀，可再次离心。
7．加入上清1/5体积冰预冷的内毒素清除剂，振荡混匀，溶液变浑浊，冰浴2min至溶液变清亮。
8．37℃水浴2min，不时振荡，溶液又变浑浊。12000rpm室温离心2min，溶液应分为两相，上层水相含质粒DNA，下层油状相含内毒素。
9．将含质粒DNA的上层水相转移至新管，弃下层油状相，注意不要吸入油状相。重复抽提三次，即重复步骤7-9三次。
10．在得到的上清中加入等体积的结合液，再加入等体积的无水乙醇，混匀（上清：结合液：无水乙醇＝1：1：1）
11．玻璃奶摇匀。取20ul混匀的玻璃奶加入上面的混合液中，混匀。室温放置5分钟，期间颠倒2次。
12．10000转/分钟离心1分钟，倒掉上清；沉淀加入1ml 70%乙醇，振荡混匀，10000转/分钟离心1分钟，去上清，70%乙醇重复洗一次，再用无水乙醇洗一次。去上清，再次离心2分钟，用小吸头吸去上清。
13．室温放置10分钟（如果为大提，请延长放置时间到30分钟，此步为去除残余酒精，以免影响下游实验），加入30－50ulTE缓冲液混匀溶解，55℃水浴5分钟。离心，取上清转移到一新的离心管中。此为所提质粒。
14．电泳或者其他方法检测，进入下游实验。
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文献和实验盒包括柱离心式DNA胶回收及PCR产物快速纯化试剂盒、柱离心式质粒小量快速抽提试剂盒、柱离心式高纯质粒小量快速抽提试剂盒、 柱离心式去内毒素超纯质粒小量快速抽提试剂盒、 质粒抽提、DNA胶回收、PCR产物纯化柱离心式多用途小量纯化试剂盒、柱离心式质粒中量抽提试剂盒 、柱离心式高纯度质粒中量抽提试剂盒、 柱离心式去内毒素超纯质粒中量抽提试剂盒 、核酸纯化小柱（质粒小抽、胶回收）、核酸纯化大柱（质粒中抽、大抽）等10个产品。 现因公司产品结构调整，转让该系列试剂盒的配方、生产工艺、生产设备。包教
的时间和精力，最后因为试剂盒的问题影响实验的进度有点得不偿失，而且脂质体都比较贵。因此，性价比是最重要的因素。大部分的质粒提取试剂盒所得产物可分为如下几个级别：1.高级转染级：这是最高纯度的去内毒素的质粒纯化，主要使用于基因治疗，cell显微注射，原代细胞转染等。2.常规转染级：它要优于2次cscl超速离心纯化的质粒。3.分子生物学级，相当于1次cscl超速离心纯化的质粒。4.测序级：主要用于常规酶切与连接用。我们实验室用过qiagene，axgene，omiga和国产天根的。大家对qiagene
有浪费的嫌疑(当然经费充足无可厚非)。但是有些国产的试剂盒不怎么令然放心，象楼主这样做稳定转染 的，要花费很多的时间和精力，最后因为试剂盒的问题影响实验的进度有点得不偿失，而且脂质体都比较贵。因此，性价比是最重要的因素。大部分的质粒提取试剂盒所得产物可分为如下几个级别： 1.高级转染 级：这是最高纯度的去内毒素的质粒纯化，主要使用于基因治疗，cell显微注射，原代细胞转染等。 2.常规转染 级：它要优于2次cscl超速离心纯化的质粒。 3.分子 生物
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