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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
2~8℃
- 保质期:
长期
- 英文名:
Protein & RNA Extraction Kit
- 库存:
大量
- 供应商:
康朗生物
- 规格:
50次
细胞蛋白质-RNA双提取
英文名:Protein & RNA Extraction Kit编号:KL130829
规格:50次
产品简介:
本制品是在同一样品中同时高效快速提取Total RNA和Total Protein的试剂盒。本试剂盒的操作过程不用使用苯酚、使用本试剂盒提取的Total RNA和Total Protein可用于siRNA的效果分析、RNA/蛋白质的表达分析等。通常分析经过各种药物处理(或经siRNA Transfection)后的动物培养细胞中的靶mRNA或蛋白质的表达差异时,需要将培养细胞分成2份,或者进行两次培养,一份用于提取Total RNA,另一份用于提取Total Protein,这样实验操作复杂烦琐,实验数据误差较大。本试剂盒可以从同一样品中同时提取Total RNA和蛋白质,方便了实验操作,提高了实验可信度。
本试剂盒使用含非离子性表面活性剂的Cell Lysis Buffer裂解细胞,然后使用盐析法将染色体DNA和细胞残渣除去。实验操作只需15分钟,便可以从1×103~1×107个培养细胞中制备含Total RNA和Total Protein的可溶性溶液,此溶液可直接用于蛋白质电泳和Western Blotting分析等。此溶液经Isopropanol*1沉淀回收Total RNA,再经RNA Preparation Water溶解后的Total RNA溶液*2可用于Real Time RT-PCR法进行mRNA的表达分析等。
运输及保存:
常温运输, 4℃ 保存, 有效期一年。
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文献和实验钦文 我用人的外周血4ml分离淋巴细胞,计数约400万个细胞,分成两孔种到24孔板中,培养3天后提取淋巴细胞的RNA,由于红细胞较多,提RNA前用红细胞裂解液先处理了细胞的,操作严格按照说明书进行,我用的是Takala的Trizol,500ul,800ul,1ml的量都用过,但是每次做到加入异丙醇离心后均未见沉淀,用DEPC水溶解后跑电泳也没有条带,不知道是什么原因,RNA提不出来,实验没办法进行,着急啊,请大家帮我解答一下,万分感谢! 钦文
1. 六孔板每孔细胞中加入1ml Trizol,冰上放置5min,枪头吹打。 2. 将各孔裂解液吸到1.5 ml EP管中,加入氯仿0.2ml/管,用力振摇15s。15-30℃下孵育2-3min,离心(4℃,12,000g,15min)。 3. 离心后液体分为三层(上层-无色水样层为RNA,中层白色为DNA和底层红色为蛋白质),小心吸取上层无色液体移入一新的EP管中。 4. 加入等体积异丙醇,0.4-0.5ml,混匀,15-30℃下孵育10-30min,离心(4℃,12
提取RNA 器械:离心管2支,吸管4个,酒精灯,打火机,记号笔,200ul,1000UL枪,DEPC泡过的枪头EP管,紫外照过的手套。滤纸,DEPC纯水(750ml无水乙醇+150mlDEPC水,剧烈振荡,使劲的摇晃,直至混匀),氯仿,75%酒精,异丙醇,Trizol,预冷的离心机(两种),EP管架(洗液擦洗) 过程: 1. 取细胞悬液,室温下离心,1000rmp/min,6min,弃上清(此时可预冷另一个离心机) 2. 带手套,加Trizol 1ml/5-10*10
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