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由于反相HPLC理论踏板数高、重现性好、操作简单、性价比好,是分析蛋白质、多肽的首选分离方法。分析蛋白质和多肽时,三氟乙酸(TFA)常被用做酸性流动相,然而随着时间的推移,反相HPLC使用的传统硅胶,在强酸条件下,显示出了一些缺点。COSMOSIL AR-300系列填充柱由于采用新的合成方法,有效的提高了抗酸性,柱子寿命长,甚至在三氟乙酸的浓度为0.1%时,也能得到峰形尖锐。
色谱柱类型
COSMOSIL AR-300系列填充柱提供三种烷基柱:
| 应用实例:多肽(含10种氨基酸)的梯度分离。
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| COSMOSIL®
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文献和实验非常成功地应用于液相色谱分离。LiChrosorb RP-8 和RP-18 适合于碱性样品的色谱分。 Hypersil 填料 ( 300A ) Hypersil 300A 填料是基于5um和10um,孔径为300A 的硅胶为基质的HPLC填料适合越来越多的生物大分子分离与分析的需要,现可提供C18 C8 C4 的填料 *Hypersil 300A C18 适合亲水性强的分子量大于5000的小肽酶的水解片断及各种天然和合成小肽的分析 *Hypersil 300
相关专题 蛋白纯化技术专题 HP-RPC的选择首先要看蛋白质的分子 量,20kDa左右的一般用C4或C8,再小一点的可以用C18,太大的蛋白并不适于反相分离。C18通用性最好,但是有时候保留过强可能会导致收率较低。如果目的蛋白不是很针对,可以考虑通用性最强的C18柱。 一般来说,4.6mm的内径比较常见,250mm长的柱子比150mm的柱子分离度要好,无论对小肽还是蛋白都是这样。 其次要注意填料的孔径,80A左右的填料主要是用于小分
积)。 ⑵ 泵入保存液,不同色谱柱用不同保存液,钻石C18柱应尽可能用100%乙腈或甲醇保存。 ⑶ 卸下色谱柱后,立即用接头密封,放在稳定环境中保存。 8. 柱的再生 不同柱用不同方法再生,请参看各种色谱柱说明。 钻石反相键合相C18、C8、pH、CN柱用以下程序: 用20倍柱体积的溶剂按下列程序冲洗色谱柱。(按箭头方向冲) 水→甲醇→氯仿→甲醇 水冲洗时可用热蒸溜水(55℃)或加入少量(0.8%)DMSO冲洗。 一般情况下不提倡反向冲洗色谱柱,必要时可反向冲。
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