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- TIANDZ
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- 2025年07月12日
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- 文献和实验
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- 保存条件：
低温运输，-20℃保存
- 保质期：
1年
- 英文名：
pET23-CBD-(-PP)-EGFP-H246,249D
- 库存：
大量
- 供应商：
信裕生物
质粒编号:
质粒名称: pET23-CBD-(-PP)-EGFP-H246,249D
其他名称: CBD(201-314)-F271C-H246,249D-EGFP
质粒大小（bp）: 4300
抗性: Ampicillin
质粒类型: Bacterial Expression
是否病毒:
启动子:
稳转或瞬转:
组成型或诱导性:
表达水平: Low Copy
蛋白标签:
测序引物:
GenBank号:
其他属性:
Fusion protein or tag:EGFP
Growth strain(s)DH5alpha
质粒图谱:
质粒序列:
>12598 with T7
CTTTAGAAGGAGATATACCATGGACATCCAGAACCCTGACATCACGAGTTCACGATACCGTGGGCTCCCA
GCACCTGGACCTAGCCCAGCTGATAAGAAACGCTCAGGGAAGAAGAAGATCAGCAAAGCTGATATTGGTG
CACCCAGTGGATTCAAGGATGTCAGCGACGTGGGGTGGGACCCCCAGAATGGATTTGACGTGAACAACCT
CGACCCAGATCTGCGGAGTCTGTGCTCCAGGGCAGGAATCAGCGAGGCCCAGCTCACCGACGCCGAGACC
TCTAAACTTATCTACGACTTCATTGAGGACCAGGGTGGGCTGGAGGCTGTGCGGCAGGAGATGAGGCGCC
AGGAGCCACTTGAATTCGGTGGCGGTGGCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGT
GCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGC
GATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCA
CCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGA
CTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGAACGGCAC
TACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATC
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文献和实验dmdfe 本人将GFP基因后面加了一段大约110bp的序列，插入PET28A的BamH1和Hind3位点，最后在BL21中表达。 经SDS-PAGE验证表明： 目的蛋白 大量存在菌体裂解后沉淀即包涵体中，但是该沉淀无色。 少量存在于上清中，上清显微弱的绿色。 看文献大量报道GFP融合蛋白几乎都形成可溶性表达，目的蛋白在上清中，并且诱导条件没有太大要求。 想请教一下各位做过GFP原核表达的经验
加热灭活酶。通过凝胶提取试剂盒纯化消化的pET-32α（+）载体骨架和从pMD18-T载体切下的基因片段。用T4 DNA连接酶在23℃下用pET-32α（+）载体骨架连接基因片段1小时，载体末端和插入末端的比例为1：3（fmol）。将10μl连接反应与100μl感受态大肠杆菌 BL21（DE3）在冰上混合10分钟，并将混合物在42℃下孵育90秒。加入800μlLB并在37°C下孵育40分钟。涂在含有100μg/ ml氨苄青霉素的LB平板上。在37°C孵育过夜。通过菌落PCR筛选插入物的存在或制备
很多新手在问做原核表达需要考虑的载体和菌株的选择，现系统地解答一下，供新手借鉴。
表达提供不同严紧性， pET 系统还根据诱导物（ IPTG ）浓度，对目标蛋白表达提供了真正的“变阻器”控制。 Tuner 和 OrigamiB 宿主菌的 lacY 突变使这种控制成为可能。 选择 pET 载体 所有的 pET 载体均来自 pBR322 ，但彼此间先导序列、表达信号、融合标签、相关限制性位点和其它特点有所不同。有两大类 pET 质粒，即转录载体和翻译载体： 转录载体（包括 pET-21 、 pET-23 和 pET-24 ）表达目标 RNA ，但不提供翻译信号。它们用于
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