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文献和实验植物体内硝态氮含量可以反映土壤氮素供应情况,常作为施肥指标。另外,蔬菜类作物特别是叶菜和根菜中常含有大量硝酸盐,在烹调和腌制过程中可转化为亚硝酸盐而危害健康。因此,硝酸盐含量又成为蔬菜及其加工品的重要品质指标。测定植物体内的硝态氮含量,不仅能够反映出植物的氮素营养状况,而且对鉴定蔬菜及其加工品质也有重要的意义。 传统的硝酸盐测定方法是采用适当的还原剂先将硝酸盐还原为亚硝酸盐,再用对氨基苯磺酸与α-萘胺法测定亚硝酸盐含量。此法由于影响还原的条件不易掌握,难以得出
【原理】硝酸还原酶(NR)是植物氮素同化的关键酶,它催化植物体内的硝酸盐还原为亚硝酸盐: 产生的亚硝酸盐与对–氨基苯磺酸(或对–氨基苯磺酰胺)及α–萘胺(或萘基乙烯二胺)在酸性条件下定量生成红色偶氮化合物。其反应如下:生成的红色偶氮化合物在540nm波长下有最大吸收峰,可用分光光度法测定。硝酸还原酶活性可由产生的亚硝态氮的量表示。一般以Nμg·g﹣1·h﹣1为单位。NR的测定可分为活体法和离体法。活体法步骤简单,适合快速、多组测定。离体法复杂,但重复性较好。【仪器与用具】分光光度计;真空抽气
1分钟,静置10分钟,将试管中悬浊液过量地倾入离心管中,使部分流出管外,白色粉膜即可去除。离心5分钟(4000r/min),取清液在520nm下比色测定,绘制标准曲线。方法适用范围在20μg以内。 2.组织液的提取:称取棉花功能叶柄0.5g,剪成1梍2mm碎片,于研钵中加少量蒸馏水研磨,移于干燥的三角烧瓶中,加入蒸馏水20ml,振荡1梍3分钟,放置澄清后(或离心之),取上清液2ml,再按标准曲线制作方法测定硝态氮。叶柄中硝态氮含量根据下列公式计算:植物组织中硝态氮含量(
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