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BL21(DE3)感受态细胞

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  • 2025年07月15日
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    • 保存条件

      -70℃

    • 保质期

      6个月

    • 英文名

      BL21(DE3) Ultracompetent cells

    • 库存

      50

    • 供应商

      康朗生物

    • 规格

      20×100μl

    BL21(DE3)感受态细胞基本信息
    感受态细胞名称: BL21(DE3) Ultracompetent cells;BL21(DE3) 超级感受态细胞
    菌种类型: E.coli
    产品规格: 20X110 微升
    转化效率: 大于1X10的9次方
    基因型: BL21(DE3)感受态细胞基因型
    抗性: 无抗性
    质粒转化条件: 42 ℃热激
    生长条件: 37 ℃, 有氧
    用途: 非毒性蛋白表达。
    储存条件: -70 ℃或者更低温度保存,避免反复冻融。
    BL21(DE3)感受态细胞操作方法
    1. 取-80℃保存的农杆菌感受态于冰上或室温融化。
    2. 每100μl感受态加1ug质粒DNA混匀,依次于冰上静置10分钟、液氮5分钟、37℃ 5分钟、冰浴5分钟。
    3. 加入700μl无抗生素的2YT或LB液体培养基,于28℃振荡培养2~3小时。
    4. 5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的2YT或LB平板上,倒置放于28℃培养箱培养2-3天。
    BL21(DE3)感受态细胞注意事项
    1. 感受态细胞最好在冰上融化。
    2. 混入质粒时应轻柔操作。
    3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
    4. 诱导时,IPTG浓度可选(0.1-2mM均可)。
    5. 为获得需要量的蛋白,最佳诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。
    野生型E.coli并不容易转化,BL21(DE3)感受态细胞这是由于细菌产生一种酶能迅速降解进入的外源DNA。经过多年的努力,科学家们发现了一种方法可以增加细胞吸收外源DNA的效率。那就是用化学方法处理细胞,使其改变膜对DNA的通透性。这种细胞就称为感受态细胞,即细胞处于能摄入核酸分子时的生理状态。这种方法已经成为基因工程的常规技术,它对于我们利用体外DNA重组技术来了解真核和原核生物的基因功能特别重要。细菌的转化有两种类型:一种是自然转化(natural transformation),在自然转化中细菌可以自由地吸收DNA,通过它来进行遗传转化;另一种是工程转化(engineered transformation),在这种转化中,细菌发生改变使得它们能摄入并转化外源DNA。枯草杆菌中的转化属于自然转化,E.coli转化就属于工程转化。

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