- ¥998 - 3650
- 康朗生物
- CAT#: KL1071
- 中国/上海
- 2025年07月15日
企业认证
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
60
- 英文名：
DH10Bac Chemically Competent Cell
- 保质期：
6个月
- 供应商：
上海康朗生物科技有限公司
- 保存条件：
-80℃
- 规格：
100μl/支
DH10Bac
DH10Bac Chemically Competent Cell 产品说明书产品规格（CAT#: KL1071）
DH10Bac： 100μl/支
pUC19 (control vector，10pg/μl): 10μl
保存条件(保质期)： -80℃（6个月）
基因型
F- mcrA ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC) ϕ80lacZ∆M15 ∆lacX74 recA1 endA1 araD139 ∆(ara, leu)7697 galU galK λ- rpsLnupG /pMON14272 / pMON7124
产品说明
DH10Bac菌株主要用于生产重组杆状病毒分子（Bac-to-Bac杆状病毒表达系统）。该菌株中含有父本杆粒 bMON14272 、辅助质粒 pMON7124 ：父本杆粒 bMON14272包含 mini-F复制子, 卡那抗性基因, attTn7 位点和 lacZα互补因子；辅助质粒 pMON7124 含有 tnsABCD区（tnsABCD region supplies the transposition proteins required for insertion of the mini-Tn7 from the donor plasmid into its target site on the parent bacmid），具有四环素抗性，在细胞扩增过程中丢失，但可提高供体质粒pFastBac（具有庆大霉素抗性）转化后的基因转座效率。mcrA、mcrBC及mrr突变使DH10Bac菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA（Therefore , genomic DNA , both prokaryotic and eukaryotic, can be cloned efficiently in DH10Bac）。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。ϕ80lacZΔM15 的存在使DH10Bac可用于蓝白斑筛选，DH10Bac感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率>108cfu/μg DNA。
操作方法
供体质粒（pFastBac等）转化重组方法：
1. DH10Bac感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入供体质粒（pFastBac等）1ng，并用手拨打EP管底混匀，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入900μl不含抗生素的SOC液体培养基，37℃，225 rpm复苏4小时。
4. 复苏完成后，用SOC稀释转化液到（10-1，10-2），每个稀释用吸取100ul铺一个LB平板（共涂3个平板），平板包含50ug/ml Kan，7ug/ml Gentamicin，7ug/ml tetracycline，40ug/ml X-gal，40ug/ml IPTG。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱48h（抗生素含量较高，需在37度长时间培养才能挑到合适克隆）。
阳性验证：
1. 挑10个白色的克隆，重新划线在LB平板（50ug/ml Kan，7ug/ml Gentamicin，7ug/ml tetracycline，40ug/ml X-gal，40ug/ml IPTG）。37度过夜培养。
2. 挑选白色的克隆，转接到含有50ug/ml Kan，7ug/ml Gentamicin，7ug/ml tetracycline的LB培养液中，过夜培养。
3. 使用试剂盒（QIAGEN cat. 12162）或异丙-醋酸钠法抽提重组质粒DNA（＞100kb）。使用PCR法分析重组质粒是否正确重组。
pUC19检测转化效率方法：
1. DH10Bac感受细胞态从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底混匀，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养液LB，37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 取100μl转化液涂布到含50-100ug/ml氨苄的LB平板上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱12-16h，统计计算转化效率。
注意事项
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3. 涂板时务必涂干，平板表面不留任何水份。
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验ws 各位站友，本人因克隆某个植物抗病基因而完成了其BAC文库，目前正在做图位克隆的工作。 但文库的完成耗费了大量人力、物力和财力，因此想请教下该库还有什么其它用途。或与其 它技术结合，可开展什么工作。 谢谢了。。。。 zhujoker BAC (Bacterial Artificial Chromosome, 细菌人工染色体)文库是进行全基因组测序、构建物理图谱、染色体步
BAC Manipulations for Making BAC Transgene Arrays
in bacterial artificial chromosomes (BAC). These BAC transgenes show transcriptional levels within several fold of endogenous genes while also exhibiting targeting to specific nuclear compartments similar to the targeting of the endogenous genes
Prior to getting cells:1) Turn on 42 deg bath. Takes about 30 min to reach 42 deg.2) Put 0.1 M sterile CaCl2 on ice.3) One tube of cells is good for several transformations.For two transformations:1) Put 10 μl of your ligation
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
