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- KL1177
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-70℃
- 保质期：
6个月
- 英文名：
Rosetta Blue(DE3)pLysS
- 库存：
50
- 供应商：
康朗生物
- 规格：
20×100μl
感受态细胞名称: RosettaBlue(DE3)pLysS, Rosetta Blue(DE3)pLysS
菌株类型: E.coli
产品目录号: 71060-3, 71060-4
培养基: LB培养基
生长条件: 37 ℃, 有氧
基因型: RosettaBlue(DE3)pLacI感受态细胞基因型
抗性: 氯霉素，四环素
质粒转化条件: 42 ℃热激
应用: 蛋白表达
诱导方法: IPTG
菌株特点: RosettaBlue系列菌株衍生于NovaBlue系列感受态细胞，该菌株既具有很高的转化效率，又具有recA endA lacIq 基因突变。对于包含有稀有密码子的真核蛋白，是加强型的蛋白表达菌株。
RosettaBlue(DE3)感受态细胞通过细胞内一个兼容的具有氯霉素抗性的质粒，补充提供了AGG, AGA, AUA, CUA, CCC 和GGA这些大肠杆菌中真核细胞的稀有密码子的tRNA。这对于表达含有稀有密码子的真核细胞蛋白具有很大的促进作用。
DE3是溶源性的 λDE3, 所以在lacUV5启动子下携带有T7 RNA聚合酶的染色体拷贝。该菌株适用于pET系列载体，及其他T7启动子系列载体。
RosettaBlue(DE3)感受态细胞无法使用蓝白斑筛选，因为在细胞中的DE3溶源噬菌体DNA序列上上含有LacZ的α肽段编码序列。
在RosettaBlue(DE3)pLacI细胞内，稀有的tRNA基因和Lac抑制子基因存在于细胞内的同一个质粒上。
pLacI基因型表明该菌株含有pACYC184质粒，该质粒含有Lac抑制子基因。
菌株是recA-, endA-, lacIq , 具有很高的质粒转化效率。
RosettaBlue(DE3)pLacI感受态细胞操作方法
1. 取-80℃保存的农杆菌感受态于冰上或室温融化。
2. 每100μl感受态加1ug质粒DNA混匀，依次于冰上静置10分钟、液氮5分钟、37℃ 5分钟、冰浴5分钟。
3. 加入700μl无抗生素的2YT或LB液体培养基，于28℃振荡培养2~3小时。
4. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的2YT或LB平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天。
RosettaBlue(DE3)pLacI感受态细胞注意事项
1. 感受态细胞最好在冰上融化。
2. 混入质粒时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4. 诱导时，IPTG浓度可选（0.1-2mM均可）。
5. 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。
野生型E.coli并不容易转化，RosettaBlue(DE3)pLacI感受态细胞这是由于细菌产生一种酶能迅速降解进入的外源DNA。经过多年的努力，科学家们发现了一种方法可以增加细胞吸收外源DNA的效率。那就是用化学方法处理细胞，使其改变膜对DNA的通透性。这种细胞就称为感受态细胞，即细胞处于能摄入核酸分子时的生理状态。这种方法已经成为基因工程的常规技术，它对于我们利用体外DNA重组技术来了解真核和原核生物的基因功能特别重要。细菌的转化有两种类型：一种是自然转化（natural transformation），在自然转化中细菌可以自由地吸收DNA，通过它来进行遗传转化；另一种是工程转化（engineered transformation），在这种转化中，细菌发生改变使得它们能摄入并转化外源DNA。枯草杆菌中的转化属于自然转化，E.coli转化就属于工程转化。
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文献和实验Xl1-Blue菌株基因型：endA1 gyrA96（nalR） thi-1 recA1 relA1 lac glnV44 F'[Tn10 proAB+ lacIq Δ（lacZ）M15] hsdR17（rK- mK+）。特点：具有卡那抗性、四环素抗性和氯霉素抗性。用途：分子克隆和质粒提取。BL21（DE3）菌株基因型：F- ompT gal dcm lon hsdSB（rB- mB-） λ（DE3 [lacI lacUV5-T7 gene 1 ind1 sam7 nin5）。特点：该菌株用于
摘要： 本文主要介绍了各种感受态细胞的区别、用途和特征. Xl1-Blue菌株 基因型： endA1 gyrA96（nalR） thi-1 recA1 relA1 lac glnV44 F'[Tn10 proAB+ lacIq Δ（lacZ）M15] hsdR17（rK- mK+）.
菌等，前者Dam和Dcm甲基化酶已敲出，而后者细胞内本就没有甲基化酶，从这些细胞中抽提的 DNA就能被上述酶切割。 E.coli JM110 要排除dam,dcm甲基化的影响，需要用特定的dam-,dcm-的菌株，如JM110 如果由JM110或 SCS110等甲基化缺失的菌株产生的质粒，则不会被甲基化. 各种感受态细胞的区别 用途 特征
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