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- 进口/国产
- KL1153
- 2025年07月07日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-70℃
- 保质期：
6个月
- 英文名：
DH5α-T1 UltraCompetent Cells
- 库存：
50
- 供应商：
康朗生物
- 规格：
20×100μl
感受态细胞名称: DH5α-T1 UltraCompetent Cells
菌株类型: E.coli
规格: 20X110uL
培养基: LB培养基
生长条件: 37 ℃, 有氧
基因型: DH5α-T1感受态细胞基因型
抗性: 无
质粒转化条件: 42 ℃热激
应用: cDNA文库构建、质粒克隆
菌株特点: DH5α-T1是cDNA文库的克隆菌株，DH5α-T1感受态细胞能够高效转化分子量大的质粒，同时对T1和T5噬菌体有抵抗性。
DH5α-T1 UltraCompetent Cells感受态细胞操作方法
1. 取-80℃保存的农杆菌感受态于冰上或室温融化。
2. 每100μl感受态加1ug质粒DNA混匀，依次于冰上静置10分钟、液氮5分钟、37℃ 5分钟、冰浴5分钟。
3. 加入700μl无抗生素的2YT或LB液体培养基，于28℃振荡培养2~3小时。
4. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的2YT或LB平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天。
DH5α-T1 UltraCompetent Cells感受态细胞注意事项
1. 感受态细胞最好在冰上融化。
2. 混入质粒时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4. 诱导时，IPTG浓度可选（0.1-2mM均可）。
5. 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。
野生型E.coli并不容易转化，DH5α-T1 UltraCompetent Cells感受态细胞这是由于细菌产生一种酶能迅速降解进入的外源DNA。经过多年的努力，科学家们发现了一种方法可以增加细胞吸收外源DNA的效率。那就是用化学方法处理细胞，使其改变膜对DNA的通透性。这种细胞就称为感受态细胞，即细胞处于能摄入核酸分子时的生理状态。这种方法已经成为基因工程的常规技术，它对于我们利用体外DNA重组技术来了解真核和原核生物的基因功能特别重要。细菌的转化有两种类型：一种是自然转化（natural transformation），在自然转化中细菌可以自由地吸收DNA，通过它来进行遗传转化；另一种是工程转化（engineered transformation），在这种转化中，细菌发生改变使得它们能摄入并转化外源DNA。枯草杆菌中的转化属于自然转化，E.coli转化就属于工程转化。
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文献和实验法、 CaCl2、 RuCl等化学试剂法感受态细胞：处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能容许外源 DNA 分子通过时细胞的状态。转化细胞(转化子)：带有异源 DNA 分子的受体细胞( Transformant )。本实验以 E.coli DH5α 菌株为受体细胞，用 CaCl2 处理受体菌使其处于为感受态，然后与 pUC18质粒共保温，实现转化。 pUC18质粒携带有抗氨苄青霉素的基因，因而使接受了该质粒的受体菌具有抗氨苄青霉的特性，用 Apr符号表示。将经过转化后的全部受体细胞经过适应稀释，在含氨
Standard Operating Procedures for T1-Phage Testing Assay
lawn, the lawn there will be lysed on incubation overnight. II. Materials and Equipments: DH10B (original glycerol stock) or DH10B cultured stock for phage test. DH10B-T1 phage infected cells (positive control).
如果用来建库或者转化比较珍贵的材料可以试一下这种感受态！效率非常高！ Simple and Efficient Method (SEM) to Make Competent Cells Preparation of Frozen Competent of DH5α （1） 250 ml TB solution 10mM Pipes or 10 mM Hepes, 0.65g 15 mM CaCl2, 0.55g 250 mM KCl, 4.66g *55
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