C41(DE3)pLysS感受态细胞

C41(DE3)pLysS感受态细胞基本信息
感受态细胞名称: C41(DE3)pLysS
菌株类型: E.coli
产品目录号: 60444-1/ 60444-2
培养基: LB培养基
生长条件: 37 ℃, 有氧
基因型: C41(DE3)pLysS感受态细胞基因型
抗性: 氯霉素
质粒转化条件: 42 ℃热激
应用: 蛋白表达
诱导方法: IPTG
菌株特点:
过表达C41(DE3), C41(DE3) pLysS, C43(DE3), and C43(DE3) pLysS感受态细胞宿主菌能够有效表达来源于各个物种包括细菌，酵母，植物，病毒和动物等多个物种的有毒蛋白。

该系列宿主菌基因中含有突变，可以包容有毒蛋白的表达。C41(DE3)来源于BL21(DE3)。该宿主菌含有一个基因突变，能够降低T7 RNAP的酶活力，所以能够阻止过表达重组表达有毒蛋白的细胞死亡。

正如标准的BL21(DE3)菌株，过表达菌株C41(DE3), C41(DE3)pLysS, C43(DE3), 和C43(DE3)pLysS是λDE3的溶源性菌株。这些菌株在lacUV5启动子的下游含有一个T7 RNA聚合酶基因。这些宿主菌适合于表达克隆于T7启动子表达载体上的基因。过表达菌株C41(DE3), C41(DE3)pLysS, C43(DE3), 和C43(DE3)pLysS在lon和ompT蛋白酶的缺陷上是不同的。

过表达的C41(DE3)和C43(DE3)pLysS携带有一个氯霉素抗性质粒，该质粒能够表达少量的T7溶菌酶。这个酶是T7RNA聚合酶的天然抑制剂。这些宿主菌能够有效抑制T7RNA聚合酶在诱导剂诱导前的表达水平，所以能够稳定菌株去编码特定的独立蛋白。在培养细菌的过程中，应该加入34 µg/mL的氯霉素来维持pLysS质粒的存在。

请注意的是，该过表达系列宿主菌的蛋白表达量与BL21(DE3)相比要稍低。
C41(DE3)pLysS感受态细胞操作方法
1. 取-80℃保存的农杆菌感受态于冰上或室温融化。
2. 每100μl感受态加1ug质粒DNA混匀，依次于冰上静置10分钟、液氮5分钟、37℃ 5分钟、冰浴5分钟。
3. 加入700μl无抗生素的2YT或LB液体培养基，于28℃振荡培养2~3小时。
4. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的2YT或LB平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天。
C41(DE3)pLysS感受态细胞注意事项
1. 感受态细胞最好在冰上融化。
2. 混入质粒时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4. 诱导时，IPTG浓度可选（0.1-2mM均可）。
5. 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。
野生型E.coli并不容易转化，C41(DE3)pLysS感受态细胞这是由于细菌产生一种酶能迅速降解进入的外源DNA。经过多年的努力，科学家们发现了一种方法可以增加细胞吸收外源DNA的效率。那就是用化学方法处理细胞，使其改变膜对DNA的通透性。这种细胞就称为感受态细胞，即细胞处于能摄入核酸分子时的生理状态。这种方法已经成为基因工程的常规技术，它对于我们利用体外DNA重组技术来了解真核和原核生物的基因功能特别重要。细菌的转化有两种类型：一种是自然转化（natural transformation），在自然转化中细菌可以自由地吸收DNA，通过它来进行遗传转化；另一种是工程转化（engineered transformation），在这种转化中，细菌发生改变使得它们能摄入并转化外源DNA。枯草杆菌中的转化属于自然转化，E.coli转化就属于工程转化。