毕赤酵母SMD1168菌种

毕赤酵母表达系统在外源基因表达中的研究进展及应用

和Pichia 2个种属，共有30余种［8］，其中尤以P.pastoris发展最快，研究最清楚。目前，用于外源基因表达的P.pastoris菌株为Invitrogen公司构建，主要有：Y11430，MG1003，GS115，KM71和SMD1168，其中Y11430为野生型，其余皆为组氨酸突变型，GS115有完整的aox1基因，在甲醇培养基上表型为Mut+，当用重组表达载体转化后，由于表达载体线化所用酶不同，其转化子表型可能是Mut+或Muts，可通过MD和MM培养基进行表型的鉴定；KM71的aox

毕式酵母表达常见问题及解析

， （3）电击后复活要快。 不过上面的确麻繁，理解加手熟就能达到，最后效率和菌种有关，一般能达到10的9方，有的能达到10的10方。不过现在我做普通转化就不麻繁，过夜菌彻底用EP管小离心，常温10%甘油洗干净，重悬后做电转，用LB或SOC复活立刻铺盘，只要洗的干净，还没有克隆转不出来的，半h就搞定了，只是每次都要鉴定，因为电转杯是反复用，怕别的残留污染。 7、问：转化了一个基因到毕赤酵母，蛋白有表达，但pcr无论如何也检测不到阳性的特性条带，该如何改进，请指点 参考见解：本人曾经遇到过同样情况，后来

CHO细胞与酵母细胞比较

被分解而减少目的蛋白的降解；②改变培养基 pH值，由于毕赤酵母可以在pH值为3.0~7.0的范围内正常生长，调节 pH值可以改变蛋白酶的活性，从而减少蛋白质的降解；③应用蛋白酶缺陷型菌株，如：SMD1163、1165、1168。 其次，有些蛋白在毕赤酵母中表达量很低或不表达，原因至今尚未完全阐明，但可能与以下几方面有关： （1）毕赤酵母与人及其它物种一样对所使用的氨基酸密码子具有不同的偏好性，这可能限制其蛋白质翻译速度。比较 110种酵母基因密码子使用情况发现，所有基因可分为明显的两组：高表达组