自诱导液体培养基（arab启动子）

在大肠杆菌中高效表达外源蛋白的策略

的lac阻遏蛋白突变体，能够同时允许热诱导和IPTG诱导[41，42]。尽管野生型lacI基因也能热诱导，但不能对其进行严紧型调节，且不能用于lacIq 菌株，因为温度的变化不能遏制由lac阻遏蛋白的过量表达所造成的严紧性抑制[43]。因此，该系统只能用用于生产对宿主菌无害的一些蛋白。 冷反应启动子尽管不象其他启动子那样得到广泛的研究，但已经被证明能在低温条件下进行有效的基因表达。噬菌体λPL启动子的活性在20℃时最高，随着温度的升高，其活性逐渐降低[44]。PL启动子的冷反应由E.coli

Nature 子刊：超声波调控肿瘤内细菌的基因表达，助力肿瘤免疫治疗

的生存提供保护，使得肿瘤内的细菌能在其中不断繁殖。 不仅如此，通过基因工程手段还可以对细菌进行改造，以增强其对肿瘤的靶向迁移能力，减少对机体的毒性，大大提高了肿瘤细菌治疗的安全性；更为重要的是，细菌还是优良的基因表达宿主，可将外源基因插入原核表达质粒后导入细菌或整合进入细菌基因组，从而表达抗肿瘤因子以增强其抗肿瘤效果。 为此，近年来基于细菌的靶向给药系统在肿瘤治疗方面的应用受到了科研工作者的广泛关注。随着合成生物学技术的发展与引入，如启动子工程、智能基因线路等，有望大大提高细菌治疗肿瘤的智能

目的基因片段的PCR扩增与克隆

热稳定性聚合酶（1，2）产生PCR产物提供一个匹配碱基。如表1总结的，这些聚合酶常常以不依赖模板方式在扩增产物的3’端加上一个脱氧腺苷酸（3，4）。pGEM®-TEasy高拷贝数载体包含有T7和SP6RNA聚合酶启动子，其侧翼和多克隆位点区相接，多克隆位点区位于β半乳糖苷酶的α肽编码区内。α肽插入失活允许在指示培养基用颜色直接筛选重组克隆。另外这两个载体的多克隆位点区的限制性酶切位点适用于采用Promega公司Erase-a-Base®系统（产品目录号#E5750）产生一系列巢式缺失