自诱导培养基（lac启动子）

IPTG 诱导蛋白表达实验

E.coli 的乳糖操纵子(元)含Z、Y及A三个结构基因,分别编码半乳糖苷酶、透酶和乙酰基转移酶,此外还有一个操纵序列O、一个启动子序列P及一个调节基因I.I基因编码一种阻遏蛋白,后者与O序列结合,使操纵子(元)受阻遏而处于关闭状态. 在启动序列P上游还有一个分解(代谢)物基因激活蛋白(CAP)结合位点.由P序列、O序列和CAP结合位点共同构成lac操纵子的调控区,三个酶的编码基因即由同一调控区调节,实现基因产物的协调表达 。 在没有乳糖存在时,lac操纵子(元)处于阻遏

十张图带你读懂大肠杆菌

这个乳糖操纵子系列受阻遏蛋白调控，乳糖水平很低的时候，阻遏蛋白结合到启动子上，操纵子关闭。相反，如果乳糖存在，阻遏蛋白被抑制，转录就被诱导。此时 β-半乳糖苷酶就能正常催化乳糖。 乳糖结构式 半乳糖结构式 IPTG 似乎到这里，也没发现这对我们克隆、表达有啥用？别急，接着往下看。 Lac 操纵子的组成 Lac 操纵子的组成具体如下。我们看到有一个启动子、转录调控位点（图中 c）、CAP 结合位点（图中

IPTG诱导pET载体目的蛋白表达的原因分析

酶的调控方式仍可能有痕量的本底表达，控制基础表达的手段之一是培养基外加葡萄糖，有助于控制本底表达水平。 二是采用带有T7 lac启动子的载体 ——这些质粒在紧邻T7启动子的下游有一个lac操纵子序列。它们同样带有常规启动子以及编码lacI阻遏蛋白的序列，T7lac和 lacI启动子位置交错。采用这种载体及DE3溶原菌，lac阻遏蛋白既可以作用于宿主染色体lacUV5 启动子，抑制宿主聚合酶转录T7 RNA聚合酶，也可以作用于载体T7lac 启动子，从而阻断任何 T7 RNA聚合酶导致