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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
常温运输及保存
- 保质期:
二年
- 英文名:
Auto-induction Medium
- 库存:
60
- 供应商:
泽叶生物
- 规格:
200 mL
本产品是在pET专用生长培养基的基础上开发而成的,它利用E.coli自身对培养 基中碳源和能源的调控利用机制,实现外源蛋白在细菌达到饱和期后的自动诱发。
具有下列特点:
1. 不需添加任何IPTG或相关诱导物,节约成本。
2. 免去了密切监控菌液密度的过程,尤其适合大规模筛选 。
3. 细菌生长密度远高于IPTG诱导表达系统 。
4. 外源蛋白表达量远远高于IPTG诱导表达系统。
5. 本产品即开即用,操作简单 。
6. 与各种细胞培养容器兼容(如培养瓶、培养罐、深孔管、发酵罐等)。
自诱导培养基(lac启动子)使用及效果
用本产品以及LB+IPTG诱导培养细菌获得的外源蛋白表达量比较
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文献和实验E.coli 的乳糖操纵子(元)含Z、Y及A三个结构基因,分别编码半乳糖苷酶、透酶和乙酰基转移酶,此外还有一个操纵序列O、一个启动子序列P及一个调节基因I.I基因编码一种阻遏蛋白,后者与O序列结合,使操纵子(元)受阻遏而处于关闭状态. 在启动序列P上游还有一个分解(代谢)物基因激活蛋白(CAP)结合位点.由P序列、O序列和CAP结合位点共同构成lac操纵子的调控区,三个酶的编码基因即由同一调控区调节,实现基因产物的协调表达 。 在没有乳糖存在时,lac操纵子(元)处于阻遏
这个乳糖操纵子系列受阻遏蛋白调控,乳糖水平很低的时候,阻遏蛋白结合到启动子上,操纵子关闭。相反,如果乳糖存在,阻遏蛋白被抑制,转录就被诱导。此时 β-半乳糖苷酶就能正常催化乳糖。 乳糖结构式 半乳糖结构式 IPTG 似乎到这里,也没发现这对我们克隆、表达有啥用?别急,接着往下看。 Lac 操纵子的组成 Lac 操纵子的组成具体如下。我们看到有一个启动子、转录调控位点(图中 c)、CAP 结合位点(图中
图谱 需要注意的是: 由于T7 RNA 聚合酶的调控方式仍可能有痕量的本底表达,控制基础表达的手段之一是培养基外加葡萄糖,有助于控制本底表达水平。 二是采用带有T7 lac启动子的载体——这些质粒在紧邻T7启动子的下游有一个lac操纵子序列。它们同样带有常规启动子以及编码lacI阻遏蛋白的序列,T7lac和 lacI启动子位置交错。采用这种载体及DE3溶原菌,lac阻遏蛋白既可以作用于宿主染色体lacUV5 启动子,抑制宿主聚合酶转录T7 RNA聚合酶,也可以作用于载体T
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