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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
冷藏
- 保质期:
长期
- 库存:
424
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 规格:
100T
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销售,产品线涵盖SABC(山羊IgG)-FITC免疫组化试剂盒怎么卖在内的分子生物学试剂产品,还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。
名称:SABC(山羊IgG)-FITC免疫组化试剂盒怎么卖
规格:100T
编号:XH106
产地:国产|进口
试剂盒组成:
1, 封闭液:10ml,5%BSA
2, Bio-兔抗山羊:浓缩液100ul。
3, SABC-FITC:浓缩液100ul。
4, 稀释液:30ml。
5, 抗荧光衰减封片剂
试剂盒简介:
本试剂盒适合于一抗为山羊IgG的免疫组化实验. FITC显色。
SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的,用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质,同亲和素一样,对生物素有极高的亲和力,亲和素是一个碱性蛋白质(IP=10),经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性,对组织和细胞的非特异吸附很低,基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—Biotin Complex。SABC大约可形成一百个左右的过氧化物酶和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的酶将保证SABC具有很高的敏感性。
自备试剂:
1.粘片剂多聚赖氨酸。
2. 0.01 M PBS(pH7.2-7.4)
3. 0.01M柠檬酸钠缓冲液
4、抗荧光衰减封片剂
实验步骤:
以石蜡切片热修复为例
1. 切片常规脱蜡至水。
2.热修复抗原:将切片浸入0.01M 枸橼酸盐缓冲液(PH6.0),电炉或微波炉加热至沸腾后断电,间隔5-10分钟后,反复1-2次。冷却后PBS(pH7.2-7.6)洗涤1-2次。
3.滴加5%BSA封闭液,室温20分钟。甩去多余液体, 不洗。
4.用稀释液将一抗(如山羊抗IL-10)按一定比例稀释(稀释后的一抗4℃可保存一周),也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗,37 ℃ 1小时左右或20℃时2小时左右。也可4℃过夜。PBS(pH7.2-7.4)洗2分钟×3次。(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说,阳性染色强度不够时,可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时,可降低一抗浓度和缩短孵育时间。)
5.根据使用量,用稀释液将生物素化羊抗山羊IgG浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ulBio-兔抗山羊IgG浓缩液,混匀即成工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加生物素化羊抗山羊IgG工作液,20-37℃ 30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗2分钟×3次。
6.根据使用量,用稀释液将SABC-FITC浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul SABC-FITC浓缩液,混匀即成SABC-FITC工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加SABC-FITC工作液,20-37℃,30分钟(避光)。PBS(pH7.2-7.4)洗5分钟×4次。
7.滴加抗荧光衰减封片剂封片。荧光显微镜观察。
注意事项:如果染色背景过高,在SABC反应之后,用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗涤切片4次,PBS洗2次,然后封片观察。
关于SABC(山羊IgG)-FITC免疫组化试剂盒怎么卖的更详细说明,请致电我公司咨询,我们将以最饱满的热情为您提供解答,此外,我公司专业供应下列产品:
·辣根过氧化物酶(HRP)标记套装
编号:XH087
规格:一套
保存条件:HRP(辣根过氧化物酶)-20度保存,透析袋2-8度处理。其他常温保存。
产品说明:本套装是将HRP标记的常用试剂集合为一体而成。本操作流程为经碘的高碘酸氧化法。适合于蛋白等含有氨基物质的标记。特别是抗体的标记。
如果待标记物分子量太小(如小于15KD),可能会穿过透析袋而造成样品损失。
标记原理:在低PH下使RP经NaIO4氧化后形成的醛基可蛋白等分子的氨基相连,形成斯夫氏硷,后者可进一步用NaBH4还原生成稳定的酶标记物。
操作方法:
一, 标记量的计算:HRP(辣根过氧化物酶)分子量为40KD左右。一般为HRP:待标记物=2:1到4:1之间。比如抗体IgG分子量一般为150-160KD。则10mg HRP可标记抗体在10mg-20mg之间。
二, 计算好各步反应时间。作好开始标记的准备工作,最好是从下午开始。将HRP(辣根过氧化物酶)一共10mg加入1ml双蒸水溶解。溶解后可放-20度存放一个月。如果想作两次标记,可适当称量5mg。但并不推荐称量更小的质量。以免产生更大误差。而且透析袋一般也只够两次用量。
三, 剪切合适长度透析袋,用双蒸水清洗三次备用。透析袋分宽窄两种,适合于不同量样品的透析,请自己安排。称取21.3mg NaIO4,加入0.5ml双蒸水溶解(现配现用,浓度为0.2M),将100mM乙酸钠(PH4.4)用双蒸水稀释100倍成1mM乙酸钠(PH4.4)。准备待标记物,如果待标记物本身盐含量很低并且缓冲力差,如生理盐水,可等二天再准备。如果不确定,将0.2M PH9.5 CB稀释20倍(请不要一次稀释完,留1-2ml左右备用),作为透析液,将待标记物装入透析袋中4℃透析过夜,透析袋适当留长约2ml体积的量以备第二天加入酶(透析袋使用请见附录)。
四, 以一次标记完为例,如果标记量小,可按比例减小试剂的用量。取0.2ml现配的NaIO4溶液加入HRP溶液中,混匀,避光常温反应两小时。装入透析袋中,在稀释过的乙酸钠(PH4.4)溶液中4℃透析过夜(透析袋使用请见附录)。
五, 第二天早上,如果样品为固体,可用水溶解,加入1/20体积的0.2M PH9.5 CB,混匀。取出活化好的HRP装入一适合离心管中,加入50ul 0.2M PH9.5 CB,混匀,立刻加入待标记物中,混匀。避光常温反应两小时。
六, 加0.1ml新配的10mg/ml NaBH4液,混匀,常温半小时。
七, 配制合适的透析液,如生理盐水或者PBS等。透析酶标记物。
八, 如果有条件进一步纯化,可透析半天后去进一步纯化,如果不纯化,请在4℃透析至少24小时。勤换液。
附透析袋使用方法:
本透析袋已预处理过,用双蒸水清洗后将水用适当吸一下。就可直接使用。透析袋上下都可以用铁夹,但如果铁夹不够用,下部可用细线或者其他的透析袋夹。
将透析袋轻轻的折上两到三折。用线或者透析袋夹封住,上面支开,加入待透析物,留一定量的空气在顶上,并小心的折一折,用铁夹夹住,轻轻的挤压,如没发现有液体流出,可放入透析液中。一般透析可用纯净水瓶去顶使用。用一次性筷子或者其他合适物穿过铁夹,将透析袋吊在透析液中,补充透析液,使透析液盖过透析袋中的液面而不要淹过铁夹下面。
SABC(山羊IgG)-FITC免疫组化试剂盒怎么卖关键词:百奥莱博,山羊IGG,SABC(山羊IgG)-FITC免疫组化试剂盒,XH106
BTN80901 大提柱式动物RNAOUT Maxi Column Animal RNAOUT
11-氨基十一烷酸 Cupric tartrate trihydrate 2432-99-7
BFD059 磺胺类快速检测卡
E0616 抗凝裂解大牛血
没食子酸一水物 Lecithin 5995-86-8
色苷酸钠 BOC-ON 15826-37-6
N-三(羟甲基)甲基甘氨酸 Inosine 5704-04-1
ARB11372 人前列腺素F(PGF)elisa测定使用说明书 Human prostaglandin f,pg-f ELISA KIT
F040320 大鼠IgG抗原 Rats IgG
F030202 HRP标记小鼠抗人IgG Fc抗体 Monoclonal Mouse Anti-Human IgG(FC)*HRP
ARB10230 人β-微管蛋白(TUBB)elisa检测说明书 Human β-tubulin,tubb ELISA KIT
ARB11253 人胃泌素细胞抗体(GCA)代做ELISA实验 Human gastrin cell antibody,gca ELISA KIT
F030403 胶体金标记小鼠抗人IgG Fab抗体 Monoclonal Mouse Anti-Human IgG Fab*GOLD
ARB14178 人免疫球蛋白G4(IgG4)Elisa方法检测 Human immunoglobulin G4 (igG4) ELISA KIT
F030634 FITC标记山羊抗人IgG抗体 Polyclonal Goat Anti-Human IgG*FITC
HC0033 Transwll 聚碳酸酯膜嵌套5.0um
PY04-082 吖啶黄素 1.5mg/支×10支 每支添加于100mlEB增菌液培养基基础中,用于单增李斯特氏菌的增菌培养
SABC(山羊IgG)-FITC免疫组化试剂盒怎么卖关键词:百奥莱博,山羊IGG,SABC(山羊IgG)-FITC免疫组化试剂盒,XH106
·去内毒素质粒DNA提取试剂盒
编号:XH012
规格:50T/200T
原理简介
本试剂盒在常规质粒提取试剂盒的基础上改进而来,增加内毒素清步骤,提取的质粒可用于一些要求更高的实验,如转染。
本试剂盒(以200T为例)可以用200小次或者10大次提取。
注意事项
1.溶液Ⅱ低温时可能出现析出和沉淀,可以37度水浴几分钟即可恢复澄清透明。用完请及时盖紧盖子。
2.溶液Ⅰ中加入RNase 后请放2-8度保存,如果长久不用(如一个月),可-20度冻存,或者按照比较分次加入。
3.可根据实验情况中量或者大量提取,加入的试剂等比放大。
4.内毒素清除剂在常温下出现面混浊现象,为正常,在2-8℃放置一段时间混浊会消失。
5.本试剂盒在去除内毒素的过程中会损失少量质粒,因而相对于常规提取,本试剂盒得率偏低。
操作步骤(以小量提取为例,中提或者大提可等比例加入)
在溶液Ⅰ中加入RNaseA,混匀,2-8度保存。
1.取过夜菌1-5毫升,5000g离心1分钟收集细菌沉淀,弃上清(可重复多次收集于一管中,收集量可考虑菌液浓度与质粒拷贝数),如为阳性细菌,可加入100mg/ml的溶菌酶悬浮菌液,37度处理30分钟,离心,收集沉淀。
2.在收集的菌液中,加入200ul溶液I,重悬细菌沉淀。确保沉淀完全散开,无可见细菌团块(可vortex 5-10秒或更长时间)。室温放置2-3分钟。
3.每管加入200ul溶液Ⅱ(如有沉淀,可37度水浴),轻轻颠倒离心管4-6次,使细菌完全裂解,溶液透明。放置2-3分钟,不过超过5分钟。但也不要混匀后立刻加入溶液Ⅲ。
4.放置2-3分钟后,每管加入200ul溶液III,随即颠倒离心管4-6次混匀,可见白色絮状物产生。
5.最高速(13,000rpm左右)室温离心5分钟。
6.将上清转移到新的离心管中,如有沉淀,可再次离心。
7.加入上清1/5体积冰预冷的内毒素清除剂,振荡混匀,溶液变浑浊,冰浴2min至溶液变清亮。
8.37℃水浴2min,不时振荡,溶液又变浑浊。12000rpm室温离心2min,溶液应分为两相,上层水相含质粒DNA,下层油状相含内毒素。
9.将含质粒DNA的上层水相转移至新管,弃下层油状相,注意不要吸入油状相。重复抽提三次,即重复步骤7-9三次。
10.在得到的上清中加入等体积的结合液,再加入等体积的无水乙醇,混匀(上清:结合液:无水乙醇=1:1:1)
11.玻璃奶摇匀。取20ul混匀的玻璃奶加入上面的混合液中,混匀。室温放置5分钟,期间颠倒2次。
12.10000转/分钟离心1分钟,倒掉上清;沉淀加入1ml 70%乙醇,振荡混匀,10000转/分钟离心1分钟,去上清,70%乙醇重复洗一次,再用无水乙醇洗一次。去上清,再次离心2分钟,用小吸头吸去上清。
13.室温放置10分钟(如果为大提,请延长放置时间到30分钟,此步为去除残余酒精,以免影响下游实验),加入30-50ulTE缓冲液混匀溶解,55℃水浴5分钟。离心,取上清转移到一新的离心管中。此为所提质粒。
14.电泳或者其他方法检测,进入下游实验。
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文献和实验说明:这是我今年做免疫组化的一点体会,奉献给大家。如有不正确的地方,敬请指教。同时,这也是我应付《免疫组化》的一份作业,老师给了我85分。斑竹呀,如果觉得有点用,就请鼓励一下,加点分吧!:D:D:D应用SABC法进行免疫组化染色的体会SABC(Strept Actividin-Biotin Complex)法是一种显示组织和细胞中抗原分布的简便而敏感的免疫组化染色方法。由于该方法中的链霉亲和素的等电点接近中性(pH=6.0-6.5),对组织和细胞的吸附性特别低,因而具有较低的背景。它的步骤
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