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- 详细信息
- 技术资料
- 保存条件:
冷藏
- 保质期:
长期
- 库存:
589
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 规格:
10ml/100ml
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销售北京非冻型组织细胞RNA保存液(RNAwait)现货供应,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
产地:国产|进口
规格:10ml/100ml
编号:XH020
品牌:百奥莱博
非冻型组织细胞RNA保存液(RNAwait)是一种在较高温度下保存动物组织及细胞RNA样品的非冻型无毒溶液,它能迅速渗入细胞内,通过高效抑制RNase的活性而保存RNA的完整性。
此产品有些公司又叫组织RNA保存液,或者RNAlocker。实际功能是相同的。
保存条件:15–25℃,保质期2年。低温条件下有结晶析出时加热至37℃溶解后使用。
产品特点
1.操作简单,将组织剪薄浸没在RNAWAIT中即可使其RNA不被降解。
2.替代液氮,使样品的保存不需液氮,干冰或-80℃冰箱,尤其适用于临床和野外样品的快速和大规模采集。
3.RNA完整,因RNAwait能迅速抑制组织中RNA酶的活性,故从中提取的RNA的质量跟液氮保存的样品相比不相上下。
4.方便运输,处理过的样品能在25℃保存一周,使样品邮寄和运输变得容易和便宜,有利学术合作和交流。
5.反复冻融,经RNAwait处理的样品可反复冻融20次,其间可对样品进行各种处理而不影响最终提取的RNA的质量。
6.结果准确,RNAwait进入细胞十分快速,基因表达在发生应急改变前就得以锁定,故RNA分析更能反映取样时的真实情况。
7.可比性强,RNAwait能减少大规模样品处理中的误差,增加各次实验数据间的可比性,对大规模基因表达谱的分析尤其有用。
8.兼容性广,处理过的样品可以使用TRIzol 等试剂提取其RNA,样品还可直接用于组织切片,免疫学和流式细胞分析而不影响RNA的质量。
技术指标
37℃ 一天(保存三天的样品RNA有部分降解)
18-25℃ 一周(保存两周的样品RNA有轻微降解)
2-8℃ 一个月
-20℃和-80℃ 长期
操作流程:
1. 根据要保存的各样本的体积,计算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量应当是组织体积的10倍(100mg组织约用1ml RNAwait);离心收集2×107细胞RNAwait的用量是1ml。加入RNAwait的原则是:量宁多勿少。建议在实际操作中不要称量组织,而直接根据目测结果加入RNAwait量,以加快操作和减少污染。例如5mm边长的立方体组织块,体积为125mm3=125µl,故应当加入1.25ml的RNAwait液。
2. 将RNAwait按需要量分装入自备保存管中。
3. 快速将较大的组织切成厚度<0.5 cm的任意片状,较小的组织直接取下,立即完全浸入RNAwait中。组织的厚度一定要<0.5 cm。组织过厚则RNAwait不能有效渗入,组织中间部位的RNA不能受到保护。较大的组织可以切成厚度<0.5 cm的任意片状后保存,较小的组织(如大鼠的肾脏、脾脏,小鼠的大部分器官)则可以直接浸入RNAwait。
4. 将收集管存放于温度适当的地方,存放时间不能超过该温度下的最长存放时间(请看技术指标),如果要存放在-20℃或-80℃,需先将样品在4℃放置过夜后再转移到最后的温度。注:将样品转移到-20℃或-80℃前,需要弃掉保护液。
注意事项:
1.组织和细胞取材速度要快,在获取后应当尽快浸入RNAwait,以防止RNA降解。
2.冰冻组织不能用RNAwait保存,因为RNAwait不能有效渗入冰冻组织。
3.保存样品的RNA提取:样本从-20℃或-80℃冰箱取出后,复温到室温后,取出组织块,再用于提取RNA。细胞样本则复温后低速离心收集细胞,去除RNAwait,再用于提取RNA。后继的处理(如组织匀浆)可以在室温下进行,不必在液氮中操作,RNA仍能有效得到保护。残留少量RNAwait保存液不影响后继提取RNA的质量。
除北京非冻型组织细胞RNA保存液(RNAwait)现货供应外,我公司正在打折促销以下产品:
·SYBR Green I(20×)定量PCR用
编号:XH027
规格:1ml
SYBR Green I与dsDNA 结合荧光信号可增强800—1000倍。在PCR反应体系中,加入过量SYBR Green I荧光染料,SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后,荧光信号增强,而不掺入链中的SYBR Green I染料分子荧光不变,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。荧光可以在退火阶段或者延伸阶段测定。
使用浓度对荧光PCR结果的影响
SYBR Green I荧光定量PCR的试验成功有很多因素,但是SYBR Green I的使用浓度是非常关键的因素,如果SYBR Green I的浓度过低会使荧光信号的变化降低。这就意味着低拷贝的样品可能无法检出;而在高浓度时,将会抑制PCR反应。降低PCR反应效率。所以一般在使用SYBR Green I时应根据实际情况优化使用浓度。
我们提供的为20×的浓缩液,使用时可稀释20—100倍,即使反应的终浓度为1×到0.2×之间。
镁离子浓度的影响
提高镁离子浓度可以降低SYBR Green I对PCR反应的抑制作用。我们建议在用SYBR Green I进行荧光PCR反应时,镁离子浓度要比无SYBR Green I 的普通 PCR 反应要高出 0.5 到3mM。
·动物线粒体DNA提取试剂盒
编号:XH001
规格:50T/100T
二,保存条件
本试剂盒整体保存于2-8度一年。使用前,在DNA酶I中加入600ul(50T)或者1100ul(100T)的DNA酶反应液,分装后-20度保存。线粒体裂解液使用前常温保存,如有沉淀可37度水浴溶解,不影响使用。
三,说明
线粒体DNA提取的关键是尽可能的去掉核DNA。本试剂盒利用差速离心到比较纯净的线粒体,再利用DNA酶消化裂解缓冲系统等多步骤去掉核DNA,最后得到纯净的线粒体DNA。可用于PCR等对纯度要求较高的实验。
本试剂盒用于从动物细胞或组织中分离出完整而纯化的线粒体。适合于动物软组织(肝或脑组织)和硬组织(肌肉)以及培养细胞线粒体DNA的提取制备。不适合植物及其他标本的提取。
四,操作步骤
准备工作:在DNA酶I中加入600ul(50T)或者1100ul(100T)的DNA酶反应液,适当分装后-20度保存。线粒体裂解液保存于常温,如有沉淀37℃水浴溶解,离心机温度下降到4℃(2-8℃),如无低温离心机,也可以常温离心,并将离心时间为10min的改为5min,但最后所得DNA品质及产量可能会有一定影响。
1. 样本处理
a. 组织匀浆:称取100~200 mg新鲜组织如肝脏、脑、心肌等,PBS或生理盐水冲洗,洗净血水,滤纸吸干,用剪刀剪为碎块放入小容量玻璃匀浆器内。加入1.0 mL冰预冷的Lysis Buffer,0℃冰浴上下研磨组织20次;
b. 培养细胞匀浆:消化细胞,PBS洗涤,800 × g 5~10 min离心收集细胞。计数。每次提取需要5 × 107个细胞,加入1.0 mL冰预冷的Lysis Buffer重悬细胞,将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内,0℃冰浴研磨30~40次;
2. 将组织或细胞匀浆物转移到离心管,4℃,1000× g 离心5 min;
3. 取上清,加入一新的离心管中,4℃,1000× g 再次离心5 min。
4.取上清,加入一新的离心管中,4℃, 12,000 × g 离心10 min。离心后的上清含胞浆成分,可从中提取胞浆蛋白。将上清转移到新离心管,线粒体沉淀在管底;
5. 在线粒体沉淀中加入0.5 mL Wash Buffer重悬线粒体沉淀,4℃,1000× g 离心5 min;
6.取上清,加入一新的离心管中,4℃, 12,000 × g 离心10 min。弃上清,高纯度的线粒体沉淀在管底;
7. 加入100ul DNA酶反应液重悬线粒体,吹打均匀后,再加入10ul DNA酶I溶液(见准备工作),混匀,37度水浴10min。此步为消化线粒体表面吸付的核DNA。4℃, 12,000 × g 离心5 min。尽可能的弃上清,再加入200ul TE 重悬线粒体沉淀,离心,洗去残留的DNA酶。
8.得到的沉淀,用100ul TE 重悬线粒体沉淀。加入200ul线粒体裂解液,轻轻混匀(不可吹打),放置2min左右,不超过5min,再加入150ul蛋白沉淀液,迅速混匀。4℃, 12,000 × g 离心5 min。此步骤可进一步去除核DNA。
9.取上清,加入一新的离心管中(可选用等体积的酚氯仿异戊醇25:24:1抽提一次,再用氯仿抽提一次,或者直接用氯仿抽提两次,一般来说,此步可省,并不影响后续的PCR),加入0.6倍体积的异丙醇(如无异丙醇,可加入2.5倍体积的乙醇沉淀DNA)及10ul 核酸核酸助沉剂,混匀,-20℃沉淀半小时左右(此步可省),4℃, 12,000 × g 离心10 min。
10. 弃上清,再加入1ml 70%乙醇,4℃, 12,000 × g 离心10 min。重复用70%乙醇洗一次。
11. 弃上清后再次离心1min 吸弃上清,开盖凉干约5-10分钟。
12.加入20-30ul TE缓冲液,轻弹管底,37度水浴5分钟,线粒体DNA溶解。
13. 进行DNA电泳检测及-20度保存,进行下步的实验。
四 注意事项:
1. 为保证获得完整及尽可能多的线粒体,匀浆条件要示:第一是全程低温操作。第二是快速。第三,如用条件可将匀浆后的碎片在显微镜下观察。与组织块相比,培养细胞特别是贴壁培养细胞在用玻璃匀浆器匀浆时较难破壁,因而要选用小容量玻璃匀浆器、间隙严密的研杵上下研磨培养细胞。
2.线粒体DNA本身含量很低,如果电泳检测不到,可加大上样量,用更少量的TE溶解沉淀,或者直接进入PCR检测。
2. 以离心力g计算正确的离心速度,不同的离心机可据此精确计算离心速度。
一般低温度心机都有离心力显示,如果没有,可以用以下公式简单的换算。
转速与离心力换算
G=1.11×(10-5)×R×[rpm]2
G为离心力,一般以g(重力加速度)的倍数来表示;
[rpm] 2即:转速的平方; R为半径,单位为厘米。
北京非冻型组织细胞RNA保存液(RNAwait)现货供应关键词:非冻型组织细胞RNA保存液,XH020,RNAwait
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