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信裕生物
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2 ug
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文献和实验注意的是,Illumina测序仪使用的桥式PCR与传统的桥式PCR有所不同,它会交替使用Bst 聚合酶 进行延伸反应以及使用甲酰胺(formamide)进行变性反应。这样,经过桥式PCR扩增之后,也会在固相载 体上形成一个个的模板“克隆”。一块芯片的8条独立“泳道”上每一条泳道都可以容纳数百万的模板“克 隆”,这样一次就可以同时对8个不同的文库进行测序。 经过上述PCR扩增步骤之后,所有的模板都被线性化处理(linearization)而形成单链模板,接着与测 序引物退火、杂交。随后使用修饰的DNA聚合酶和四
的,也可以是多拷贝的,成串联形式排列,但整合位点的特异性尚未确定。 (二)Ti质粒转化植物细胞的战略 1. Ti质粒的改造 有以下理由使天然的Ti质粒不能作为表达载体使用: a. 生长在培养基上的植物转化细胞产生大量的生长素和分裂素阻止了细胞再生长为整株植物,因此,必须除去生长素和分裂素基因。 b. 有机碱的合成与T-DNA 的转化无关,而且可能会影响植物细胞生长,因为有机碱合成大量消耗精氨酸和谷氨酸,因此必须去除有机碱合成基因(tmt) c. Ti质粒约为200kb,重组操作非常苦难
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