DNA探针变性液

IL-2 DNA探针的标记

IL-2 DNA 探针的标记       地高辛是一种仅存在于洋地黄类物质花叶中的类固醇半抗原，又称异羟基洋地黄毒甙配基，地高辛精可以通过一个11个碳原子的连接臂与尿嘧啶核甘酸嘧啶环上的第5组碳原子相连接形成地高辛精标记的尿嘧啶甘酸:Boehringer Mannheim公司出售的地高辛精标记核苷酸有dig- UTP，dig- dUTP和dig-dduTP，它们分别适用于RNA探针、DNA探针和寡核苷酸探针的标记。地高辛精标记核甘酸主要通过酶反应标记核酸探针，用标记探针做原位杂交，杂交

地高辛配基随机标记DNA探针

1．标记DNA探针 每次标准的反应可标记10ng至3线性的DNA，也可标记更大量的DNA，但所有的成分和体积要相应增加。 （1）DNA探针热变性，煮沸10min，迅速冷却于冰/乙醇中5min以上，待用。（2）取Eppendorf管（1.5ml）置于冰上，加下列及试剂：新鲜变性的DNA 1-3六聚核苷酸混合物 2（管5）dNTP标记用混合底物 2（管6）加无菌重蒸水至 19DNA聚合酶Ⅰ大片段（Klenow） 1（管7）（3）在37℃保温至少60min，可到20h。（4）煮沸5min

双链DNA探针切口平移法

反应。 　　(4) 反应液中加入醋酸铵,使终浓度为0.5mol/L, 加入两倍体积预冷无水乙醇沉淀回收DNA探针。