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- 2025年07月07日
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2年
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pK7GWIWG2 II-RedRoot
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kelei-bio
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20μl
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柯雷生物拥有数万种质粒，菌种，基因，细胞株，试剂盒等科研资源，还提供基因合成，质粒改造，载体构建和蛋白表达等精品实验服务
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文献和实验被有效裂解。解决方法：可用经典碱裂解法抽提质粒 DNA 方法中的 II 液替代 Solution II 使用。 3.出现严重的 RNA 污染？ （1）未在 Solution I 中事先加入 RNase A1。解决方法：补加 RNase A1。 （2）加入 RNase A 1的 Solution I 长期保存于室温，导致 RNase A1 活性下降。 （3）细菌过量, RNase A1 不能有效降解 RNA。解决方法：将细菌用量减半或增加 RNase A1 在 Solution I 中
mmol/L Tris HCl（pH8.0）10 mmol/L EDTA（pH8.0）Tips：这一步主要作用是重悬菌体，EDTA 是金属螯合剂，主要作用是防止下一步的裂解过程中内切酶对质粒进行切割。4. 加入 200ul 新配置的溶液 II，盖紧管口，快速颠倒离心管 5 次，切勿震荡，将离心管置于冰上。溶液 Ⅱ0.2 mol/L NaOH（临用前用 10 mol/L 贮存液现用现稀释）1% SDS Tips：菌体在强碱性条件下裂解，释放出包括质粒在内的核酸，蛋白等物质。注意混匀要轻柔
成熟的 crRNA。在 II 型系统中，Pre-crRNA 可通过重复序列与其互补序列 transacting RNA（trancrRNA）反式结合，然后在 Cas9 存在的情况下被 RNaseIII 加工融合成一个 sgRNA。目前，II 型系统是最成熟也是应用最广的类型，而 Cas9 已经变成了在多种细胞类型和组织中靶向基因编辑的强大工具。第三阶段：靶向干扰（Target interference）I 型和 II 型系统均可靶向含有与 PAM 和 protospacer 互补序列的 dsDNA
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