| 出品公司: | ZYbscience |
|---|---|
| 载体名称: | pET-DEST42 |
| 质粒类型: | 大肠杆菌表达载体；Gateway载体 |
| 高拷贝/低拷贝: | 低拷贝 |
| 克隆方法: | Gateway |
| 启动子: | T7/ lac |
| 载体大小: | 7440 bp |
| 5' 测序引物及序列: | T7 Fwd: 5'd[TAATACGACTCACTATAGGG]3' |
| 3' 测序引物及序列: | -- |
| 载体标签: | His Tag (C-端）；V5 Epitope Tag（C-端） |
| 载体抗性: | 氨苄青霉素（Ampicillin）、氯霉素（仅空载体） |
| 克隆菌株: | DB3.1（空载体复制） |
| 表达菌株: | BL21-AI(适用于表达毒性基因）；BL21Star（DE3) |
| 备注: | 表达水平受严格调控。 |
| 产品目录号: | 12276-010 |
| 稳定性: | -- |
| 组成型/诱导型: | 诱导型（IPTG) |
| 病毒/非病毒: | 非病毒 |
- ¥2500
- ZYbscience
- 中国/美国
- ZY12276-010
- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃低温保存
- 保质期：
三年
- 英文名：
pET-DEST42
- 库存：
20
- 供应商：
泽叶生物
载体基本信息
载体质粒图谱和多克隆位点信息
载体简介
The Champion pET-DEST42 Gateway destination vector is designed for rapid cloning with a Gateway entry clone using lambda phage site-specific recombination and subsequent high-level prokaryotic expression controlled by the strong bacteriophage T7 promoter. Expression is induced by the production of T7 RNA polymerase in BL21(DE3) E. coli. The Champion pET-DEST42 destination vector offers:
Bacteriophage T7lac promoter for high-level expression
O operator sequences for lac repressor binding to ensure tighter regulation of transcription
pBR322 ori for minimal basal expression
C-terminal V5 and 6xHis tags for efficient detection and purification
R sites for efficient recombination with any attL-flanked Gateway entry vector
载体序列
LOCUS pET DEST42 Gateway 7440 bp DNA SYN
DEFINITION pET DEST42 Gateway
ACCESSION
KEYWORDS
SOURCE
ORGANISM other sequences; artificial sequences; vectors.
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7440
/organism="pET DEST42 Gateway"
/mol_type="other DNA"
gene complement(32..283)
/label="tet (887 - 636)"
/gene="tet (887 - 636)"
misc_feature 215..234
/label="pBRrevBam_primer"
promoter 318..336
/label="T7_promoter"
misc_feature 336..363
/label="lacO"
misc_feature 402..526
/label="attR1"
misc_feature complement(426..526)
/label="attR2"
promoter 551..574
/label="lac_promoter"
gene 635..1294
/label="CAT/CamR"
/gene="CAT/CamR"
CDS 635..1294
/label="ORF frame 2"
/translation="MEKKITGYTTVDISQWHRKEHFEAFQSVAQCTYNQTVQLDITAF
LKTVKKNKHKFYPAFIHILARLMNAHPEFRMAMKDGELVIWDSVHPCYTVFHEQTETF
SSLWSEYHDDFRQFLHIYSQDVACYGENLAYFPKGFIENMFFVSANPWVSFTSFDLNV
ANMDNFFAPVFTMGKYYTQGDKVLMPLAIQVHHAVCDGFHVGRMLNELQQYCDEWQGG
A*"
misc_feature 1636..1941
/label="ccdB"
/translation="MEKKITGYTTVDISQWHRKEHFEAFQSVAQCTYNQTVQLDITAF
LKTVKKNKHKFYPAFIHILARLMNAHPEFRMAMKDGELVIWDSVHPCYTVFHEQTETF
SSLWSEYHDDFRQFLHIYSQDVACYGENLAYFPKGFIENMFFVSANPWVSFTSFDLNV
ANMDNFFAPVFTMGKYYTQGDKVLMPLAIQVHHAVCDGFHVGRMLNELQQYCDEWQGG
A*"
misc_feature complement(1982..2089)
/label="attR1"
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文献和实验相关实验
加热灭活酶。通过凝胶提取试剂盒纯化消化的pET-32α（+）载体骨架和从pMD18-T载体切下的基因片段。用T4 DNA连接酶在23℃下用pET-32α（+）载体骨架连接基因片段1小时，载体末端和插入末端的比例为1：3（fmol）。将10μl连接反应与100μl感受态大肠杆菌 BL21（DE3）在冰上混合10分钟，并将混合物在42℃下孵育90秒。加入800μlLB并在37°C下孵育40分钟。涂在含有100μg/ ml氨苄青霉素的LB平板上。在37°C孵育过夜。通过菌落PCR筛选插入物的存在或制备
相关专题 1)噬菌体DE3溶源化的菌株如BL21(DE3)是最常用的表达菌株，噬菌体DE3是λ噬菌体的衍生株，构建好的表达载体 可以直接转入表达菌株中，诱导蛋白的表达方式与lac启动子一样都是IPTG诱导。 2)表达菌株BL21(DE3)上带有lacI基因，T7 RNA 聚合酶编码基因以及lacUV5启动子，lacUV5启动子可以启动T7 RNA 聚合酶的表达; 3)表达质粒 如pET-28质粒带有T7启动子和编码阻遏
Expression System、HisPatch ThioFusion System、pBAD Inducible Bacterial System、pL System和T7-based Systems。这四个系列的载体可谓把原核表达的发展史中出现过的几种启动子都囊括进去了，包括T7、pL、pBAD和trc启动子，同时几种经典的调控方式也都出现了，包括有乳糖操纵子、色氨酸操纵子和阿拉伯糖操纵子。 冠军系列 Champion™ pET Expression System之所以取
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pET-DEST42载体
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