基因敲除定制服务

产品概述
本服务依赖于我们独特的技术优势，保证提供的结核分枝杆菌突变菌株有95%以上的成功率，并提供完善的技术报告和后续服务。

服务周期
6-8个月

优势
1、技术平台成熟 分别在华北、华东、华中、华南有4处实验基地，可根据客户需求就近开展实验
2、成功率高 潮霉素抗性平板中挑取的克隆子中，超过95%的为阳性克隆子。
3、可提供后续技术服务 若客户需要进行后续实验，我们可以提供相关技术咨询/支持等服务。

应用
1、建立生物模型，对目的基因功能和代谢途径进行分析和研究；
2、结合临床动物模型，对疾病的分子机理和基因治疗进行深入研究；
3、结核病新药研发前期的科学研究和新药筛选评价；

技术原理与实验步骤
采用噬菌体介导的同源重组进行基因敲除：首先构建同源交换位点（AES），随后将其整合到结核分枝杆菌噬菌体基因组中，获得噬菌粒（phasmid）；将噬菌粒导入耻垢分枝杆菌，获得整合有同源交换位点的重组噬菌体，经体外扩增获得高滴度的重组噬菌体，对结核分枝杆菌进行转染；将转染后的结核分枝杆菌涂布到含潮霉素抗性的固体培养基上，37℃培养4-5周，挑取单克隆，通过PCR等方式进行验证。

必须基因敲除
临床株原则上不单独敲除，但是鼓励野生型和临床株同时敲除同一基因（价格与野生型一致）；
必需基因的突变是先将突变的片段“回补”，再对目的基因敲除

定制服务项目类型	项目说明	项目过程	交货周期
必须基因敲除	临床株原则上不单独敲除，但是鼓励野生型和临床株同时敲除同一基因（价格与野生型一致）； 必需基因的突变是先将突变的片段“回补”，再对目的基因敲除	例如：对某一基因进行敲除，并在这段基因上做2个位点的分别定点突变。 流程为：先将已经突变好的片段基因“回补”至目的基因附近；再对目的基因进行敲除。 整个流程为3次敲除，2次突变“回补”。	8~10个月
非必须基因敲除	临床株原则上不单独敲除，但是鼓励野生型和临床株同时敲除同一基因（价格与野生型一致）； 非必需基因突变是先敲除，再将突变的片段基因“回补”	例如：对某一基因进行敲除，并在这段基因上做2个位点的分别定点突变。 流程为：对目的基因进行敲除，得到突变体；然后再将已经突变好的基因“回补”至突变体中。 整个流程为1次敲除，2次突变“回补”。	6-8个月
联合敲除	同时敲除多个基因	联合敲除N个基因（N≥2)：敲除A基因并标记--去标记--敲除B基因并标记--去标记--敲除C基因……	16-17个月（以2个非必需基因联合敲除的项目周期为例。一个标记与去标记的周期为1个月，费用为15000，）
回补株	回补株不单独做，必需签订先敲除再回补的绑定合同，项目周期加1个月	先敲除目的基因，再“回补”。	2个月
突变	突变不单独做，必需签订先敲除再突变回补的绑定合同，项目周期加1个月	敲除与突变“回补”共同进行，见“必须基因敲除”和“非必须基因敲除”。	2个月

注：“片段敲除”同“单基因敲除”。