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- 文献和实验
- 技术资料
- 保质期:
6-12months
- 英文名:
Recombinant Succinate Dehydrogenase Complex Subunit A (SDHA)
- 库存:
大量
- 供应商:
泽叶生物
- 规格:
50ug/100ug/1mg
上海泽叶生物科技有限公司是一家集研发、生产和销售于一体的生命科学实验室产品创新性高科技企业。主要从事免疫学,重组蛋白,细胞因子,抗原/多肽/蛋白等产品主要包括免疫调节蛋白、白细胞介素、CSFs、生长因子、干扰素、Chemokines 、Adipokines 、TGFß / BMP Proteins、神经因子、FGFs和TNF配体/受体防御因子等。并代理销售Amresco,qiagen Millipore,eBioscience,Sigma,SANTA,Sciencell,R&D、GBD、ATCC、HYCLONE, CELLutions Biosystems INC , Neuromics , Chemicon, Equitech-bio, Biovision, Promega, Kamiya, Prospec, Cytoskeleton, Novagen, SurModics, Cytelligen LONZA等二十多家国外知名品牌,致力于为广大高校、科研院所和企事业单位提供一流的科研试剂和完善的技术服务。
经甲醛固定的部分组织细胞,因固定过程中可能会形成醛键或羧甲基而封闭部分抗原决定簇,使免疫组化标记敏感性明显降低,因此在染色前,有些抗原需进行修复或暴露。
抗原修复方法可分为化学方法和物理方法。化学方法是以酶消化方法,常用胰蛋白酶及胃蛋白酶,配制浓度与消化时间要适度。常用的物理方法有单纯加热、微波处理和高压加热。在选用这三种方法时,浸泡切片的缓冲液的离子强度和pH、加热的温度和时间均影响着抗原修复效果。
1、pH的应用范围及选择
抗原修复液的pH非常重要,有效的抗原修复pH要比修复液的化学成分更重要,同样的修复液随着pH的升高染色的强度逐渐增强,但最佳pH范围为6.0-10.0。目前大家公认的最好的抗原修复液是pH6.0的柠檬酸盐缓冲液和pH8.0的EDTA缓冲液。作为通用修复液碱性pH的修复液要比酸性的有效,而对固定很长时间旧的存档组织,酸性pH的修复液则优于碱性的修复液。
2、抗原修复时应选择最佳温度
70-90℃的温度对未经固定的蛋白质可发生变性,但经福尔马林固定的蛋白质,温度必须达到92℃以上方能使其变性。研究结果显示,温度为92-98℃是合适的,95℃效果最好。
3、抗原修复液必须遵循自然降温规律,否则效果不好或达不到抗原修复的目的
抗原修复持续时间过后,取出放于室温中让其慢慢地降温,绝对不能为了争取时间,强行用冰块或冷水使其降温。这是因为当高温中的抗原蛋白分子链脱离了其他的束缚或联结,要有一个自然环境让其自然放松下来,随着温度的降低,它们会慢慢地恢复原来的形态和构型。
4、尽量使用足量的抗原修复液
应用于抗原修复的液体,一定要充足,防止切片干涸。应用大量的抗原修复液时,由于它的量较大,可延缓液体的沸腾时间,增加切片受微波辐射的量,对抗原修复将达到彻底。
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文献和实验Strep-tag®:适用范围广 纯化选择多 由于 His-tag 系统使用 Ni 离子,所以在纯化金属蛋白(多数为酶)时,可能会受到金属间交互作用的干扰,而使用 Strep-tag® 则不会出现此问题,因 Strep-Tactin® XT 与 Strep-tag® 的特异性结合不受金属离子影响。且因其温和的纯化流程,所以还能用于纯化大型蛋白、多亚基的蛋白复合体或是跨膜蛋白,并且保持蛋白功能。以 Strep-tag® 系统纯化出不同的蛋白,下图为例: 图 1 依据研究项目的不同,各实验室使用
弄明白的领域。在报告里面,他特别提到了表达纯化CDC6蛋白的经历,我觉得十分有意思。这个蛋白, 用他的话说,是\"a pain in the ass\"。 CDC6是干什么的呢?这要从ORC说起。真核生物的DNA有多个复制起始位点 (replication origin),ORC(Origin Replication Complex)是一个很大的蛋白复合体,可以识别这些复制起始位点。ORC在整个细胞周期里面都是与DNA结合的。在G1期里面,CDC6这个蛋白会与ORC结合,同时让MCM
【转贴】 从纯化到星辰---冷泉港(CSHL)蛋白质纯化课侧记(全文完)后附全文doc文档
)是一个很大的蛋白复合体,可以识别这些复 制起始位 点。ORC在整个细胞周期里面都是与DNA结合的。在G1期里面,CDC6这个蛋白会与ORC结合, 同 时让MCM(DNA解旋酶)也装载到ORC上,形成一个pre-replication protein complex。这个 complex 一旦形成,DNA 复制的准备工作就完成,只等其他kinase的激活,细胞从G1进入S期,复制 就开始。 Stillman 实验室一直想表达酵母的CDC6和ORC的重组蛋白,然后做结构研究
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