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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保质期:
6-12months
- 英文名:
Recombinant Replication Protein A1 (ZYP1)
- 库存:
大量
- 供应商:
泽叶生物
- 规格:
50ug/100ug/1mg
上海泽叶生物科技有限公司是一家集研发、生产和销售于一体的生命科学实验室产品创新性高科技企业。主要从事免疫学,重组蛋白,细胞因子,抗原/多肽/蛋白等产品主要包括免疫调节蛋白、白细胞介素、CSFs、生长因子、干扰素、Chemokines 、Adipokines 、TGFß / BMP Proteins、神经因子、FGFs和TNF配体/受体防御因子等。并代理销售Amresco,qiagen Millipore,eBioscience,Sigma,SANTA,Sciencell,R&D、GBD、ATCC、HYCLONE, CELLutions Biosystems INC , Neuromics , Chemicon, Equitech-bio, Biovision, Promega, Kamiya, Prospec, Cytoskeleton, Novagen, SurModics, Cytelligen LONZA等二十多家国外知名品牌,致力于为广大高校、科研院所和企事业单位提供一流的科研试剂和完善的技术服务。
经甲醛固定的部分组织细胞,因固定过程中可能会形成醛键或羧甲基而封闭部分抗原决定簇,使免疫组化标记敏感性明显降低,因此在染色前,有些抗原需进行修复或暴露。
抗原修复方法可分为化学方法和物理方法。化学方法是以酶消化方法,常用胰蛋白酶及胃蛋白酶,配制浓度与消化时间要适度。常用的物理方法有单纯加热、微波处理和高压加热。在选用这三种方法时,浸泡切片的缓冲液的离子强度和pH、加热的温度和时间均影响着抗原修复效果。
1、pH的应用范围及选择
抗原修复液的pH非常重要,有效的抗原修复pH要比修复液的化学成分更重要,同样的修复液随着pH的升高染色的强度逐渐增强,但最佳pH范围为6.0-10.0。目前大家公认的最好的抗原修复液是pH6.0的柠檬酸盐缓冲液和pH8.0的EDTA缓冲液。作为通用修复液碱性pH的修复液要比酸性的有效,而对固定很长时间旧的存档组织,酸性pH的修复液则优于碱性的修复液。
2、抗原修复时应选择最佳温度
70-90℃的温度对未经固定的蛋白质可发生变性,但经福尔马林固定的蛋白质,温度必须达到92℃以上方能使其变性。研究结果显示,温度为92-98℃是合适的,95℃效果最好。
3、抗原修复液必须遵循自然降温规律,否则效果不好或达不到抗原修复的目的
抗原修复持续时间过后,取出放于室温中让其慢慢地降温,绝对不能为了争取时间,强行用冰块或冷水使其降温。这是因为当高温中的抗原蛋白分子链脱离了其他的束缚或联结,要有一个自然环境让其自然放松下来,随着温度的降低,它们会慢慢地恢复原来的形态和构型。
4、尽量使用足量的抗原修复液
应用于抗原修复的液体,一定要充足,防止切片干涸。应用大量的抗原修复液时,由于它的量较大,可延缓液体的沸腾时间,增加切片受微波辐射的量,对抗原修复将达到彻底。
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文献和实验【转帖】教你一种简单、高效的提高重组蛋白质的诱导表达量的方法
相信如何提高目的重组蛋白的诱导表达量是很多同学在研究中都会遇到的问题。记得小编在读书的时候就经常在研究这个问题,泡了无数论坛,看了无数帖子,尝试过IPTG的诱导浓度、培养基成分、诱导温度、诱导时间,甚至让别的公司帮忙做密码子优化(将目的片段通过全基因合成的方式合成出来)。总的来说,提高IPTG浓度是可以提高目的蛋白的诱导表达量的,但一般也就用到1mM的浓度,再高对细胞有毒性; 培养基营养越丰富,表达量越高,所以如果追求表达量的话,就不要用LB培养基了,用自动诱导培养基吧; 诱导温度,温度越低
。通过寡聚核苷酸[Oligo(dT)]序列或链霉亲和素等将DNA和RNA连接磁性微球表面已开发了许多应用。1、DNA/RNA结合蛋白分离在基因表达中,蛋白质也是一个重要角色,然而与DNA/RNA特异性结合得蛋白质通常寿命都很短,且含量少,链霉亲和素修饰的磁珠可用来提取分离DNP/RNP。结合有生物素的DNA或RNA序列与链霉亲和素修饰的磁珠相互作用,蛋白质识别了这些序列,就可在几分钟内结合到固定化DNA/RNA上,这种方法已被用来分离转录因子,限制性内切酶,复制蛋白等。2、mRNA分离在研究基因表达中
实验材料: 1. 6-7周龄小鼠(最好为雄性鼠,因为它们的骨头比较粗大;运输后需要休息至少5天;不要使用应激或脱水的老鼠) 2. 70%乙醇 3. 冰冷的以及室温的RPMI-1640培养基(如Life Technologies) 4. 氯化铵溶液0.02mol/L Tris·Cl,pH7.2 /0.14mol/L NH4 Cl 5. 裂解淋巴细胞的抗体(杂交瘤上清)(可选)。例如,杂交瘤RA3-3A1
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