PX551载体

手把手教你利用 CRISPR-Cas9 系统精准敲除靶标基因

2 Cas9 - 2 hitKO 系统三、Cas9 - 2 hitKO 系统中涉及到的载体为了达到高效的敲除效率，我们在同一个载体重引入 cas9 酶和两个向导性 RNA。整个系统包括 3 个载体： PX458M ，PX459M 和 EZ-GuideXH。PX458M ，PX459M 除了含有 Cas9 和一个向导性 RNA 插入位点，还引入第二个向导性 RNA 插入位点。EZ-GuideXH 是为插入第二个向导性 RNA 的辅助性载体。PX458M 带有 EGFP 荧光标记; PX459M 带有

搞定 CRISPR/Cas9 系统操作

CRISPR/Cas9 是一种强大的基因组编辑工具，今天我们介绍 CRISPR/Cas9 系统操作。以下操作说明是基于作者冰糖个人实验室操作，仅供参考。 质粒介绍我们使用的是 Feng Zhang 实验室的系统的 pX330 质粒，如下图所示： 酶切系统 37 ℃, 3 hr；Run 1% gel，回收。Elute 到 50 mL H2O。我们利用 BbsI 消化载体形成粘末端，以利于下游 oligo 退火产物的连接；酶切时请充分，且绝对不能加 CIP 处理

丝状噬菌体的基因与蛋白质

，共有11个编码基因，编码区占整个基因组的90％以上，在基因gⅢ与基因gⅧ之间以及基因gⅡ与基因gⅣ之间存在着非编码基因间隔区，为调控序列。蛋白质表达量大的如pⅧ之前其启动子则较强，反之则较弱如pⅢ。野生型丝状噬菌体的基因图谱噬菌体基因组DNA的11个编码基因分别编码11种蛋白质，根据这些蛋白质的功能，可以分成3类。(1)为噬菌体DNA复制所必需的蛋白：pⅡ、pV和pX。(2)为构成噬菌体颗粒的结构蛋白：pⅢ、pⅥ、pⅦ、pⅧ和pⅨ，其中pⅧ是构成整个病毒颗粒的主要衣壳蛋白(major coa