白绵马素AP现货直接

Western Blot实验中转膜和封闭的注意事项

烯吡咯烷酮+10mmol/L EDTA磷酸缓冲盐加热65度1小时确保碱性磷酸酶失活(可以加0.05%叠氮化钠，新鲜最好)。经济的脱脂奶配方和AP兼容得不太好，再加上HRP的底物选择范围也更宽，现在HRP是越来越普遍的选择。但是叠氮钠(NaN3)对辣根过氮化物酶(HRP)有灭活作用，如果用HRP检测系统则封闭液不要加叠氮化钠为好。切记。封闭时间和封闭剂的量都要足够。封闭不完全，后面就全白忙活了。 如果选用AP作为显色方法，封闭时就要选择Tris缓冲体系，不要用PBS，因为PBS干扰AP。再想起

增强化学发光法(ECL)

灵敏度高些的考马斯亮蓝或者氨基黑。 11. 转印后的PVDF膜在含20%甲醇溶液中在白透射光照下不用染色也依稀可以看到透明的蛋白条带，有时这种快速的方法可以不用染色识别条带，避免染色膜影响后继实验。 转膜后的封闭注意： 12. 转膜后，膜上其他的空白位置需要用封闭液封闭。Western的灵敏度某种程度上受限于封闭做的好不好。脱脂奶是最常用的经济配方，用这种封闭剂由于里面可能有痕量的生物素和碱性磷酸酶，可能造成背景污染而不适合生物素-亲和素的检测方法，脱脂奶也不适合碱性磷酸酶检测（AP）方法

3’RACE 操作步骤及实验心得

一、试剂盒的选择： 3’RACE从原理上就能明白，它比5’RACE 要容易得多，所以并不一定需要用进口试剂盒。于是根据 Invitrogen GeneRacer Kit 自己DIY了，效果不错。找来了：Invitrogen的SuperScript III反转酶，TAKaRa　LA Taq酶、Pyrobest高保真酶。并根据 Invitrogen GeneRacer Kit，自己合成了3’接头引物： 3’接头：3'ap